BACKGROUND Viruses can modulate intracellular signalling pathways to complete their infectious cycle. Among these, the PI3K/Akt pathway allows prolonged survival of infected cells that favours viral replication. GSK3β, a protein kinase downstream of PI3K/Akt, gets inactivated upon activation of the PI3K/Akt pathway, and its association with viral infections has been recently established. In this study, the role of GSK3β during Dengue virus-2 (DENV-2) infection was investigated. METHODS GSK3β participation in the DENV-2 replication process was evaluated with pharmacological and genetic inhibition during early [0-12 h post-infection (hpi)], late (12-24 hpi), and 24 hpi in Huh7 and Vero cells. We assessed the viral and cellular processes by calculating the viral titre in the supernatants, In-Cell Western, western blotting and fluorescence microscopy. RESULTS Phosphorylation of GSK3β-Ser9 was observed at the early stages of infection; neither did treatment with small molecule inhibitors nor pre-treatment prior to viral infection of GSK3β reduce viral titres of the supernatant at these time points. However, a decrease in viral titres was observed in cells infected and treated with the inhibitors much later during viral infection. Consistently, the infected cells at this stage displayed plasma membrane damage. Nonetheless, these effects were not elicited with the use of genetic inhibitors of GSK3β. CONCLUSIONS The results suggest that GSK3β participates at the late stages of the DENV replication cycle, where viral activation may promote apoptosis and release of viral particles.

中文翻译：

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糖原合酶激酶3ß参与登革热病毒2感染的晚期

背景技术病毒可以调节细胞内信号传导途径以完成其感染周期。其中，PI3K / Akt途径可延长受感染细胞的存活时间，从而有利于病毒复制。GSK3β是PI3K / Akt下游的蛋白激酶，在激活PI3K / Akt途径后失活，最近已确定了它与病毒感染的关联。在这项研究中，研究了GSK3β在登革热病毒2（DENV-2）感染中的作用。方法在Huh7和Vero细胞中，在感染的早期[0-12 h（hpi）]，晚期（12-24 hpi）和24 hpi，通过药理学和遗传学抑制作用评估GSK3β参与DENV-2复制过程。我们通过计算上清液中的病毒滴度，In-Cell Western，western blotting和荧光显微镜来评估病毒和细胞过程。结果在感染的早期发现了GSK3β-Ser9的磷酸化。在这些时间点，用小分子抑制剂治疗或在病毒感染GSK3β之前进行预处理都不会降低上清液的病毒滴度。然而，在病毒感染后很久以后，在感染并用抑制剂处理的细胞中观察到病毒滴度降低。一致地，在此阶段被感染的细胞表现出质膜损伤。尽管如此，使用GSK3β基因抑制剂并没有引起这些作用。结论结果表明，GSK3β参与了DENV复制周期的后期，在该阶段病毒激活可能促进细胞凋亡和病毒颗粒的释放。在这些时间点，用小分子抑制剂处理或在病毒感染GSK3β之前进行预处理都不会降低上清液的病毒滴度。然而，在病毒感染后很久以后，在感染并用抑制剂处理的细胞中观察到病毒滴度降低。一致地，在此阶段被感染的细胞表现出质膜损伤。尽管如此，使用GSK3β基因抑制剂并没有引起这些作用。结论结果表明，GSK3β参与了DENV复制周期的后期，在该阶段病毒激活可能促进细胞凋亡和病毒颗粒的释放。在这些时间点，用小分子抑制剂处理或在病毒感染GSK3β之前进行预处理都不会降低上清液的病毒滴度。但是，在病毒感染后很久以后，感染并用抑制剂处理的细胞中病毒滴度下降。一致地，在此阶段被感染的细胞表现出质膜损伤。尽管如此，使用GSK3β基因抑制剂并没有引起这些作用。结论结果表明，GSK3β参与了DENV复制周期的后期，在该阶段病毒激活可能促进细胞凋亡和病毒颗粒的释放。在病毒感染后很久以后，感染并用抑制剂处理的细胞中病毒滴度下降。一致地，在此阶段被感染的细胞表现出质膜损伤。尽管如此，使用GSK3β基因抑制剂并没有引起这些作用。结论结果表明，GSK3β参与了DENV复制周期的后期，在该阶段病毒激活可能促进细胞凋亡和病毒颗粒的释放。在病毒感染后很久以后，感染并用抑制剂处理的细胞中病毒滴度下降。一致地，在此阶段被感染的细胞表现出质膜损伤。尽管如此，使用GSK3β基因抑制剂并没有引起这些作用。结论结果表明，GSK3β参与了DENV复制周期的后期，在该阶段病毒激活可能促进细胞凋亡和病毒颗粒的释放。