Here, we aimed to investigate the role of long noncoding RNA (lncRNA) THRIL in septic-induced acute lung injury. C57BL/6 mice were injected with Adenoviruses (Ad)-shTHRIL or negative control (NC) before caecal ligation and puncture (CLP) operation. MPVECs were transfected with Ad-shTHRIL or NC, followed by lipopolysaccharide (LPS) treatment. MiR-424 and Rho-associated kinase 2 (ROCK2) were predicted and verified as direct targets of THRIL and miR-424, respectively, by using dual-luciferase reporter assay. ROCK2 overexpression vector and shTHRIL were co-transfected into mouse pulmonary microvascular endothelial cells for 24 h before LPS treatment. Our results showed that THRIL was highly expressed in the lung of sepsis mice. CLP triggered severe lung injury and apoptosis in mice, which was abolished by THRIL knockdown. Moreover, CLP treatment visibly increased protein concentration, the number of total cell of neutrophils, and macrophages in bronchoalveolar lavage fluid (BALF). Besides, elevated protein levels of tumor necrosis factor-α, interleukin-1β, and interleukin-6 were observed in both lung and BALF. However, inhibition of THRIL reduced the number of inflammatory cells and the production of pro-inflammatory cytokines in sepsis mouse model. The effect of THRIL on inflammatory response and apoptosis in the lung was confirmed in sepsis cell model. Moreover, mechanistic studies have shown that THRIL up-regulated ROCK2 level through sponging miR-424. Furthermore, ROCK2 overexpression reversed the inhibitory effects of THRIL knockdown on LPS-induced inflammatory response and apoptosis. Overall, in vivo and in vitro results suggested that THRIL accelerates sepsis-induced lung injury by sponging miR-424 and further restoring ROCK2.

在这里，我们旨在调查长非编码RNA（lncRNA）THRIL在败血症诱导的急性肺损伤中的作用。在盲肠结扎和穿刺（CLP）手术之前，向C57BL / 6小鼠注射了腺病毒（Ad）-shTHRIL或阴性对照（NC）。用Ad-shTHRIL或NC转染MPVEC，然后用脂多糖（LPS）处理。通过使用双荧光素酶报告基因检测，分别预测并验证了MiR-424和Rho相关激酶2（ROCK2）作为THRIL和miR-424的直接靶标。在LPS处理之前，将ROCK2过表达载体和shTHRIL共转染到小鼠肺微血管内皮细胞中24 h。我们的结果表明，THRIL在脓毒症小鼠的肺中高表达。CLP引发了小鼠的严重肺损伤和细胞凋亡，这被THRIL敲除所消除。此外，CLP治疗明显增加了蛋白浓度，嗜中性白细胞的总细胞数和支气管肺泡灌洗液（BALF）中的巨噬细胞。此外，在肺和BALF中均观察到肿瘤坏死因子-α，白介素-1β和白介素-6的蛋白水平升高。但是，在败血症小鼠模型中，抑制THRIL可以减少炎症细胞的数量和促炎细胞因子的产生。在败血症细胞模型中证实了THRIL对肺部炎症反应和细胞凋亡的影响。此外，机理研究表明，THRIL通过使miR-424海绵化而上调了ROCK2的水平。此外，ROCK2的过表达逆转了THRIL基因敲低对LPS诱导的炎症反应和细胞凋亡的抑制作用。总体而言，支气管肺泡灌洗液（BALF）中的中性粒细胞和巨噬细胞的总细胞数。此外，在肺和BALF中均观察到肿瘤坏死因子-α，白介素-1β和白介素-6的蛋白水平升高。但是，在败血症小鼠模型中，抑制THRIL可以减少炎症细胞的数量和促炎细胞因子的产生。在败血症细胞模型中证实了THRIL对肺炎性反应和细胞凋亡的影响。此外，机理研究表明，THRIL通过使miR-424海绵化而上调了ROCK2的水平。此外，ROCK2的过表达逆转了THRIL基因敲低对LPS诱导的炎症反应和细胞凋亡的抑制作用。总体而言，支气管肺泡灌洗液（BALF）中的中性粒细胞和巨噬细胞的总细胞数。此外，在肺和BALF中均观察到肿瘤坏死因子-α，白介素-1β和白介素-6的蛋白水平升高。但是，在败血症小鼠模型中，抑制THRIL可以减少炎症细胞的数量和促炎细胞因子的产生。在败血症细胞模型中证实了THRIL对肺部炎症反应和细胞凋亡的影响。此外，机理研究表明，THRIL通过使miR-424海绵化而上调了ROCK2的水平。此外，ROCK2的过表达逆转了THRIL基因敲低对LPS诱导的炎症反应和细胞凋亡的抑制作用。总体而言，在肺和BALF中均观察到白介素-1β和白介素-6。但是，在败血症小鼠模型中，抑制THRIL可以减少炎症细胞的数量和促炎细胞因子的产生。在败血症细胞模型中证实了THRIL对肺部炎症反应和细胞凋亡的影响。此外，机理研究表明，THRIL通过使miR-424海绵化而上调了ROCK2的水平。此外，ROCK2的过表达逆转了THRIL基因敲低对LPS诱导的炎症反应和细胞凋亡的抑制作用。总体而言，在肺和BALF中均观察到白介素-1β和白介素-6。但是，在败血症小鼠模型中，抑制THRIL可以减少炎症细胞的数量和促炎细胞因子的产生。在败血症细胞模型中证实了THRIL对肺部炎症反应和细胞凋亡的影响。此外，机理研究表明，THRIL通过使miR-424海绵化而上调了ROCK2的水平。此外，ROCK2的过表达逆转了THRIL基因敲低对LPS诱导的炎症反应和细胞凋亡的抑制作用。总体而言，在败血症细胞模型中证实了THRIL对肺炎性反应和细胞凋亡的影响。此外，机理研究表明，THRIL通过使miR-424海绵化而上调了ROCK2的水平。此外，ROCK2的过表达逆转了THRIL基因敲低对LPS诱导的炎症反应和细胞凋亡的抑制作用。总体而言，在败血症细胞模型中证实了THRIL对肺部炎症反应和细胞凋亡的影响。此外，机理研究表明，THRIL通过使miR-424海绵化而上调了ROCK2的水平。此外，ROCK2的过表达逆转了THRIL基因敲低对LPS诱导的炎症反应和细胞凋亡的抑制作用。总体而言，体内和体外结果表明，THRIL通过使miR-424变海绵并进一步恢复ROCK2来加速败血症诱导的肺损伤。