Caspase‐3 is a well‐described protease with many roles that impact the fate of a cell. During apoptosis, caspase‐3 acts as an executioner caspase with important proteolytic functions that lead to the final stages of programmed cell death. Owing to this key role, caspase‐3 is exploited intracellularly as a target of control of apoptosis for therapeutic outcomes. Yet the activation of caspase‐3 during apoptosis is challenged by other roles and functions (e.g., paracrine signaling). This brief report presents a way to track caspase‐3 levels using a flow cytometer that measures excited state fluorescence lifetimes and a signal processing approach that leads to a graphical phasor‐based interpretation. An established Förster resonance energy transfer (FRET) bioprobe was used for this test; the connected donor and acceptor fluorophore is cleavable by caspase‐3 during apoptosis induction. With the cell‐by‐cell decay kinetic data and phasor analyses we generate a caspase activation trajectory, which is used to interpret activation throughout apoptosis. When lifetime‐based cytometry is combined with a FRET bioprobe and phasor analyses, enzyme activation can be simplified and quantified with phase and modulation data. We envision extrapolating this approach to high content screening, and reinforce the power of phasor approaches with cytometric data. Analyses such as these can be used to cluster cells by their phase and modulation “lifetime fingerprint” when the intracellular fluorescent probe is utilized as a sensor of enzyme activity. © 2020 The Authors. Cytometry Part A published by Wiley Periodicals LLC on behalf of International Society for Advancement of Cytometry.

中文翻译：

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使用基于荧光寿命的细胞计数测量和相量分析评估细胞凋亡过程中的 Caspase-3 活性。

Caspase-3 是一种被充分描述的蛋白酶，具有许多影响细胞命运的作用。在细胞凋亡过程中，caspase-3 充当执行者 caspase，具有重要的蛋白水解功能，可导致程序性细胞死亡的最后阶段。由于这一关键作用，caspase-3 被细胞内利用作为治疗结果的细胞凋亡控制目标。然而，细胞凋亡过程中 caspase-3 的激活受到其他角色和功能（例如旁分泌信号）的挑战。这份简短的报告介绍了一种使用流式细胞仪测量激发态荧光寿命的流式细胞仪和导致基于图形相量解释的信号处理方法来跟踪 caspase-3 水平的方法。已建立的 Förster 共振能量转移 (FRET) 生物探针用于该测试；在细胞凋亡诱导过程中，连接的供体和受体荧光团可被 caspase-3 切割。通过逐细胞衰减动力学数据和相量分析，我们生成了半胱天冬酶激活轨迹，用于解释整个细胞凋亡过程中的激活。当基于寿命的细胞计数与 FRET 生物探针和相量分析相结合时，酶激活可以通过相位和调制数据进行简化和量化。我们设想将这种方法外推到高内涵筛选，并用细胞计数数据增强相量方法的力量。当细胞内荧光探针用作酶活性传感器时，诸如此类的分析可用于通过细胞的相位和调制“寿命指纹”来聚类细胞。© 2020 作者。通过逐细胞衰减动力学数据和相量分析，我们生成了半胱天冬酶激活轨迹，用于解释整个细胞凋亡过程中的激活。当基于寿命的细胞计数与 FRET 生物探针和相量分析相结合时，酶激活可以通过相位和调制数据进行简化和量化。我们设想将这种方法外推到高内涵筛选，并用细胞计数数据增强相量方法的力量。当细胞内荧光探针用作酶活性传感器时，诸如此类的分析可用于通过细胞的相位和调制“寿命指纹”来聚类细胞。© 2020 作者。通过逐细胞衰减动力学数据和相量分析，我们生成了半胱天冬酶激活轨迹，用于解释整个细胞凋亡过程中的激活。当基于寿命的细胞计数与 FRET 生物探针和相量分析相结合时，酶激活可以通过相位和调制数据进行简化和量化。我们设想将这种方法外推到高内涵筛选，并用细胞计数数据增强相量方法的力量。当细胞内荧光探针用作酶活性传感器时，诸如此类的分析可用于通过细胞的相位和调制“寿命指纹”来聚类细胞。© 2020 作者。当基于寿命的细胞计数与 FRET 生物探针和相量分析相结合时，酶激活可以通过相位和调制数据进行简化和量化。我们设想将这种方法外推到高内涵筛选，并用细胞计数数据增强相量方法的力量。当细胞内荧光探针用作酶活性传感器时，诸如此类的分析可用于通过细胞的相位和调制“寿命指纹”来聚类细胞。© 2020 作者。当基于寿命的细胞计数与 FRET 生物探针和相量分析相结合时，酶激活可以通过相位和调制数据进行简化和量化。我们设想将这种方法外推到高内涵筛选，并用细胞计数数据增强相量方法的力量。当细胞内荧光探针用作酶活性传感器时，诸如此类的分析可用于通过细胞的相位和调制“寿命指纹”来聚类细胞。© 2020 作者。当细胞内荧光探针用作酶活性传感器时，诸如此类的分析可用于通过细胞的相位和调制“寿命指纹”来聚类细胞。© 2020 作者。当细胞内荧光探针用作酶活性传感器时，诸如此类的分析可用于通过细胞的相位和调制“寿命指纹”来聚类细胞。© 2020 作者。细胞学 A 部分由 Wiley Periodicals LLC 代表国际细胞学促进会出版。