Bioimprinting is an easy, sustainable and low‐cost technique that promotes a printing of potential substrates on enzyme structure, inducing a more selective and stable conformation. Bioimprinting promotes conformational changes in enzymes, resulting in better catalytic performance. In this work, the effect of bioimprinting of Burkholderia cepacia lipase (BCL) and porcine pancreatic extracts (PPE) with four different fatty acids (lauric acid (C12:0), myristic acid (C14:0), palmitic acid (C16:0), and stearic acid (C18:0)) was investigated. The results demonstrated that the better bioimprinting effect was in BCL with lauric acid in esterification reaction, promoting BCL activation in which relative enzyme activity was 70 times greater than nonimprinted BCL. Bioimprinting results were influenced by the carbon chain length of fatty acids imprinted in the BCL, in which the effects were weaker with the chain increase. Molecular docking was performed to better understand the bioimprinting method. The results of these simulations showed that indeed all fatty acids were imprinted in the active site of BCL. However, lauric acid presented the highest imprinting preference in the active site of BCL, resulting in the highest relative activity. Furthermore, Fourier transform infrared (FTIR) analysis confirmed important variations in secondary structure of bioimprinting BCL with lauric acid, in which there was a reduction in the α‐helix content and an increase in the β‐sheet content that facilitated substrate access to the active site of BCL and led higher rigidity, resulting in high activity. Bioimprinted BCL with lauric acid showed excellent operational stability in esterification reaction, maintaining its original relative activity after five successive cycles. Thus, the results show that bioimprinting of BCL with lauric acid is a successful strategy due to its high catalytic activity and reusability.

中文翻译：

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分子生物印记激活脂肪酶：脂肪酸与酶活性位点相互作用的作用

生物印记是一种简单、可持续且低成本的技术，可促进在酶结构上印刷潜在底物，从而诱导出更具选择性和稳定性的构象。生物印记促进酶的构象变化，从而产生更好的催化性能。在这项工作中，洋葱伯克霍尔德菌的生物印记效果脂肪酶 (BCL) 和猪胰腺提取物 (PPE)，含有四种不同的脂肪酸（月桂酸 (C12:0)、肉豆蔻酸 (C14:0)、棕榈酸 (C16:0) 和硬脂酸 (C18:0)）进行了调查。结果表明，在BCL中与月桂酸进行酯化反应的生物印记效果更好，促进了BCL的活化，其中相对酶活性比未印记的BCL高70倍。生物印记结果受印在 BCL 中的脂肪酸碳链长度的影响，其中随着链的增加，影响减弱。进行分子对接以更好地理解生物印记方法。这些模拟的结果表明，确实所有脂肪酸都印在 BCL 的活性位点上。然而，月桂酸在 BCL 的活性部位表现出最高的印迹偏好，导致最高的相对活动。此外，傅里叶变换红外 (FTIR) 分析证实了月桂酸生物印记 BCL 二级结构的重要变化，其中 α-螺旋含量减少，β-折叠含量增加，促进底物接近活​​性物质。 BCL 位点并导致更高的刚性，从而导致高活性。具有月桂酸的生物印记 BCL 在酯化反应中表现出优异的操作稳定性，连续五个循环后保持其原始的相对活性。因此，结果表明，用月桂酸对 BCL 进行生物印记是一种成功的策略，因为它具有高催化活性和可重复使用性。傅里叶变换红外 (FTIR) 分析证实了月桂酸生物印记 BCL 二级结构的重要变化，其中 α-螺旋含量减少，β-折叠含量增加，有利于底物接近活​​性位点。 BCL和led的刚性更高，从而产生高活性。具有月桂酸的生物印记 BCL 在酯化反应中表现出优异的操作稳定性，连续五个循环后保持其原始的相对活性。因此，结果表明，用月桂酸对 BCL 进行生物印记是一种成功的策略，因为它具有高催化活性和可重复使用性。傅里叶变换红外 (FTIR) 分析证实了月桂酸生物印记 BCL 二级结构的重要变化，其中 α-螺旋含量减少，β-折叠含量增加，有利于底物接近活​​性位点。 BCL和led的刚性更高，从而产生高活性。具有月桂酸的生物印记 BCL 在酯化反应中表现出优异的操作稳定性，连续五个循环后保持其原始的相对活性。因此，结果表明，用月桂酸对 BCL 进行生物印记是一种成功的策略，因为它具有高催化活性和可重复使用性。其中α-螺旋含量减少和β-折叠含量增加，有利于底物进入BCL的活性位点并导致更高的刚性，从而产生高活性。具有月桂酸的生物印记 BCL 在酯化反应中表现出优异的操作稳定性，连续五个循环后保持其原始的相对活性。因此，结果表明，用月桂酸对 BCL 进行生物印记是一种成功的策略，因为它具有高催化活性和可重复使用性。其中α-螺旋含量减少和β-折叠含量增加，有利于底物进入BCL的活性位点并导致更高的刚性，从而产生高活性。具有月桂酸的生物印记 BCL 在酯化反应中表现出优异的操作稳定性，连续五个循环后保持其原始的相对活性。因此，结果表明，用月桂酸对 BCL 进行生物印记是一种成功的策略，因为它具有高催化活性和可重复使用性。