Rigorous assessment of the cellular and molecular changes during infection typically requires isolation of specific immune cell subsets for downstream application. While there are numerous options for enrichment/isolation of cells from tissues, fluorescent activated cell sorting (FACS) is accepted as a method that results in superior purification of a wide variety of cell types. Flow cytometry requires extensive fluidics and aerosol droplets can be generated during collection of target cells. Pathogens such as Francisella tularensis, Mycobacterium tuberculosis, Yersinia pestis, and SARS-CoV-2 require manipulation at biosafety level-3 (BSL-3). Due to the concern of potential aerosolization of these pathogens, use of flow cytometric-based cell sorting in these laboratory settings requires placement of the equipment in dedicated biosafety cabinets within the BSL-3. For many researchers, this is often not possible due to expense, space, or expertise available. Here we describe the safety validation and utility of a completely closed cell sorter that results in gentle, rapid, high purity, and safe sorting of cells on the benchtop at BSL-3. We also provide data demonstrating the need for cell sorting versus bead purification and the applicability of this technology for BSL-3 and potentially BSL-4 related infectious disease projects. Adoption of this technology will significantly expand our ability to uncover important features of the most dangerous infectious diseases leading to faster development of novel vaccines and therapeutics.

中文翻译：

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台式细胞分选仪在BSL-3密闭环境中的验证和应用。

严格评估感染过程中细胞和分子的变化通常需要分离特定的免疫细胞亚群以用于下游应用。尽管从组织中富集/分离细胞有多种选择，但荧光激活细胞分选（FACS）被认为是一种可对多种细胞类型进行出色纯化的方法。流式细胞术需要大量的流控技术，并且在收集靶细胞的过程中会产生气溶胶液滴。诸如弗朗西斯菌，结核分枝杆菌，鼠疫耶尔森菌和SARS-CoV-2之类的病原体需要在生物安全等级3（BSL-3）下进行处理。由于担心这些病原体可能会雾化，在这些实验室环境中使用基于流式细胞仪的细胞分选需要将设备放置在BSL-3内的专用生物安全柜中。对于许多研究人员而言，由于费用，空间或专业知识的原因，这通常是不可能的。在这里，我们描述了一种完全封闭的细胞分选仪的安全性验证和实用性，该分选仪可在BSL-3台式计算机上实现温和，快速，高纯度和安全的细胞分选。我们还提供了数据，证明了细胞分选与珠子纯化的需求，以及该技术在BSL-3和与BSL-4相关的潜在传染病项目中的适用性。采用这项技术将大大扩展我们发现最危险的传染病重要特征的能力，从而加快新型疫苗和治疗剂的开发。对于许多研究人员而言，由于费用，空间或专业知识的原因，这通常是不可能的。在这里，我们描述了一种完全封闭的细胞分选仪的安全性验证和实用性，该分选仪可在BSL-3台式计算机上实现温和，快速，高纯度和安全的细胞分选。我们还提供了证明细胞分选和珠子纯化的需求的数据，以及该技术在BSL-3和与BSL-4相关的传染病项目中的适用性。这项技术的采用将大大扩展我们发现最危险的传染病重要特征的能力，从而加快新型疫苗和治疗剂的开发。对于许多研究人员而言，由于费用，空间或专业知识的原因，这通常是不可能的。在这里，我们描述了一种完全封闭的细胞分选仪的安全性验证和实用性，该分选仪可在BSL-3台式计算机上实现温和，快速，高纯度和安全的细胞分选。我们还提供了数据，证明了细胞分选与珠子纯化的需求，以及该技术在BSL-3和与BSL-4相关的潜在传染病项目中的适用性。这项技术的采用将大大扩展我们发现最危险的传染病重要特征的能力，从而加快新型疫苗和治疗剂的开发。在这里，我们描述了一种完全封闭的细胞分选仪的安全性验证和实用性，该分选仪可在BSL-3台式计算机上实现温和，快速，高纯度和安全的细胞分选。我们还提供了数据，证明了细胞分选与珠子纯化的需求，以及该技术在BSL-3和与BSL-4相关的潜在传染病项目中的适用性。采用这项技术将大大扩展我们发现最危险的传染病重要特征的能力，从而加快新型疫苗和治疗剂的开发。在这里，我们描述了一种完全封闭的细胞分选仪的安全性验证和实用性，该分选仪可在BSL-3台式计算机上实现温和，快速，高纯度和安全的细胞分选。我们还提供了证明细胞分选和珠子纯化的需求的数据，以及该技术在BSL-3和与BSL-4相关的传染病项目中的适用性。采用这项技术将大大扩展我们发现最危险的传染病重要特征的能力，从而加快新型疫苗和治疗剂的开发。我们还提供了数据，证明了细胞分选与珠子纯化的需求，以及该技术在BSL-3和与BSL-4相关的潜在传染病项目中的适用性。这项技术的采用将大大扩展我们发现最危险的传染病重要特征的能力，从而加快新型疫苗和治疗剂的开发。我们还提供了数据，证明了细胞分选与珠子纯化的需求，以及该技术在BSL-3和与BSL-4相关的潜在传染病项目中的适用性。采用这项技术将大大扩展我们发现最危险的传染病重要特征的能力，从而加快新型疫苗和治疗剂的开发。