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Kiss1R Identification and Biodistribution Analysis Employing a Western Ligand Blot and Ligand-Derivative Stain with a FITC-Kisspeptin Derivative.
ChemMedChem ( IF 3.6 ) Pub Date : 2020-07-24 , DOI: 10.1002/cmdc.202000356 Koki Hasegawa 1 , Rika Maedomari 2 , Younosuke Sato 2 , Kumiko Gotoh 3 , Shinji Kudoh 2 , Akihiro Kojima 3 , Seiji Okada 4 , Takaaki Ito 2
ChemMedChem ( IF 3.6 ) Pub Date : 2020-07-24 , DOI: 10.1002/cmdc.202000356 Koki Hasegawa 1 , Rika Maedomari 2 , Younosuke Sato 2 , Kumiko Gotoh 3 , Shinji Kudoh 2 , Akihiro Kojima 3 , Seiji Okada 4 , Takaaki Ito 2
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It is not always easy to establish specific antibodies against receptors. Most receptors are hydrophobic and have complicated three‐dimensional structures, making them difficult to use as immunogens. Thus, we developed receptor detection methods with a fluorescein‐labeled ligand as an antibody alternative, which we referred to as a western ligand blot (WLB) and ligand derivative stain (LDS). Kisspeptin receptor (Kiss1R) was detected by its ligand. Kiss1R expression was confirmed in eight human cell lines by the WLB and in four pathological tissues by the LDS. Next, Kiss1R was stained by LDS in organs, revealing Kiss1R expression by [67Ga]Ga‐DOTA‐kisspeptin 10 accumulation. As a result, Kiss1R‐expressing cells in each organ could be stained with fluorescein‐labeled kisspeptin 14 instead of an antibody and observed by light microscopy. The combination of the WLB and LDS allows identification of receptors in tissues, which can be readily applied to target receptor detection by a synthetic ligand derivative.
中文翻译：
Kiss1R 鉴定和生物分布分析采用西方配体印迹和配体衍生物染色与 FITC-Kisspeptin 衍生物。
建立针对受体的特异性抗体并不总是那么容易。大多数受体是疏水的，具有复杂的三维结构，使其难以用作免疫原。因此，我们开发了用荧光素标记的配体作为抗体替代品的受体检测方法，我们将其称为西方配体印迹 (WLB) 和配体衍生物染色 (LDS)。Kisspeptin 受体 (Kiss1R) 被其配体检测到。Kiss1R 在 8 个人类细胞系中被 WLB 证实，在 4 个病理组织中被 LDS 证实。接下来，Kiss1R 在器官中被 LDS 染色，通过 [ 67Ga]Ga-DOTA-kisspeptin 10 积累。因此，每个器官中表达 Kiss1R 的细胞都可以用荧光素标记的 Kisspeptin 14 而不是抗体染色，并通过光学显微镜观察。WLB 和 LDS 的组合允许识别组织中的受体，这可以很容易地应用于通过合成配体衍生物进行的目标受体检测。
更新日期：2020-09-14
中文翻译：
Kiss1R 鉴定和生物分布分析采用西方配体印迹和配体衍生物染色与 FITC-Kisspeptin 衍生物。
建立针对受体的特异性抗体并不总是那么容易。大多数受体是疏水的，具有复杂的三维结构，使其难以用作免疫原。因此，我们开发了用荧光素标记的配体作为抗体替代品的受体检测方法，我们将其称为西方配体印迹 (WLB) 和配体衍生物染色 (LDS)。Kisspeptin 受体 (Kiss1R) 被其配体检测到。Kiss1R 在 8 个人类细胞系中被 WLB 证实，在 4 个病理组织中被 LDS 证实。接下来，Kiss1R 在器官中被 LDS 染色，通过 [ 67Ga]Ga-DOTA-kisspeptin 10 积累。因此，每个器官中表达 Kiss1R 的细胞都可以用荧光素标记的 Kisspeptin 14 而不是抗体染色，并通过光学显微镜观察。WLB 和 LDS 的组合允许识别组织中的受体，这可以很容易地应用于通过合成配体衍生物进行的目标受体检测。
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