Restoration of cholinergic function is considered a rational approach to enhance cognitive performance. Acetylcholinesterase inhibitors are still the best therapeutic option for Alzheimer's disease. The fruits of Piper longum have been used in traditional medicines for the treatment of memory loss. It was demonstrated that the dichloromethane extract of these fruits is able to inhibit acetylcholinesterase. Thus, the aim of this study was to identify the contained acetylcholinesterase inhibitors. The active zones were presented via TLC-bioautography, and five compounds were isolated in the process of a bioassay-guided phytochemical investigation. Their structures were characterized as piperine, methyl piperate, guineenisine, pipercide, and pellitorine using spectroscopy and spectrometry methods (UV, IR, MS, 1H-, and 13C-NMR). In vitro acetylcholinesterase inhibitory activities of the isolates and their IC50 values were determined via a colorimetric assay. Three of them exhibited enzyme inhibitory activities, with piperine being the most potent compound (IC50 of 0.3 mM). In order to investigate the binding mode of the tested compounds, docking studies were performed using the X-ray crystal structure of acetylcholinesterase from Tetronarce californica with the Protein Data Bank code 1EVE. The content of the active compounds in the extract was determined by a developed HPLC method. Piperine was present in the maximum quantity in the fruits (0.57%), whereas methyl piperate contained the minimum content (0.10%).

中文翻译：

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来自长蒺藜和结合模式预测的乙酰胆碱酯酶抑制剂的分离和表征

恢复胆碱能功能被认为是提高认知能力的合理方法。乙酰胆碱酯酶抑制剂仍然是阿尔茨海默病的最佳治疗选择。Piper longum 的果实已被用于治疗记忆丧失的传统药物。结果表明，这些水果的二氯甲烷提取物能够抑制乙酰胆碱酯酶。因此，本研究的目的是确定所含的乙酰胆碱酯酶抑制剂。活性区域通过 TLC 生物自显影呈现，并在生物测定指导的植物化学研究过程中分离出五种化合物。使用光谱法和光谱法（UV、IR、MS、1H-和 13C-NMR）将它们的结构表征为胡椒碱、胡椒酸甲酯、guineenisine、哌啶和胡椒碱。分离物的体外乙酰胆碱酯酶抑制活性及其 IC50 值通过比色法测定。其中三个表现出酶抑制活性，胡椒碱是最有效的化合物（IC50 为 0.3 mM）。为了研究测试化合物的结合模式，使用来自 Tetronarce californica 的乙酰胆碱酯酶的 X 射线晶体结构进行对接研究，蛋白质数据库代码为 1EVE。提取物中活性化合物的含量通过开发的 HPLC 方法测定。果实中胡椒碱的含量最高（0.57%），而胡椒酸甲酯的含量最低（0.10%）。其中三个表现出酶抑制活性，胡椒碱是最有效的化合物（IC50 为 0.3 mM）。为了研究测试化合物的结合模式，使用来自 Tetronarce californica 的乙酰胆碱酯酶的 X 射线晶体结构进行对接研究，蛋白质数据库代码为 1EVE。提取物中活性化合物的含量通过开发的 HPLC 方法测定。果实中胡椒碱的含量最高（0.57%），而胡椒酸甲酯的含量最低（0.10%）。其中三个表现出酶抑制活性，胡椒碱是最有效的化合物（IC50 为 0.3 mM）。为了研究测试化合物的结合模式，使用来自 Tetronarce californica 的乙酰胆碱酯酶的 X 射线晶体结构进行对接研究，蛋白质数据库代码为 1EVE。提取物中活性化合物的含量通过开发的 HPLC 方法测定。果实中胡椒碱的含量最高（0.57%），而胡椒酸甲酯的含量最低（0.10%）。提取物中活性化合物的含量通过开发的 HPLC 方法测定。果实中胡椒碱的含量最高（0.57%），而胡椒酸甲酯的含量最低（0.10%）。提取物中活性化合物的含量通过开发的 HPLC 方法测定。果实中胡椒碱的含量最高（0.57%），而胡椒酸甲酯的含量最低（0.10%）。