Double staining protocols using the most popular immunoperoxidase techniques may raise difficulties. The two ordinary detection systems may cross-talk, when the primary antibodies are derived from phylogenetically closely related animals. A color shift of the 3,3′-diaminobenzidine (DAB) polymer may occur during the second development, resulting in poor distinction between the two kinds of deposits. A post-DAB technique, sulfide-silver-gold intensification, was fine tuned to eliminate these difficulties, which may be especially suitable for colocalization of cell nuclei and perikarya of the same cells. The revised method was probed in combination with a subsequent other immunoperoxidase step or fluorochrome-tagged reagents. The nuclear antigens (BrdU, c-Fos, and Prox-1) were first visualized with DAB polymer, which were then treated with SSGI, turning the deposit black. Thereafter, cytoplasmic antigens (doublecortin, neuronal nuclei, and calbindin) were detected with either another immunoperoxidase using DAB again or immunofluorescence labeling. In both approaches, the immunopositive nuclei and cytoplasmic sites could be easily distinguished even at low magnifications. Different shielding or eluting posttreatments were compared for consecutive acetylcholinesterase histochemistry terminated with DAB development and immunohistochemistry in the same sections. In conclusion, we recommend post-DAB treatments that abolish interactions between detection systems and allow clear distinction between the two signals under various conditions:

使用最流行的免疫过氧化物酶技术的双染色方案可能会带来困难。当主要抗体来自系统发育密切相关的动物时，两个普通的检测系统可能会相互干扰。3,3'-二氨基联苯胺（DAB）聚合物在二次显影过程中可能会发生颜色变化，导致两种沉积物之间的区别很差。一种后 DAB 技术，硫化物-银-金强化，经过微调以消除这些困难，这可能特别适用于相同细胞的细胞核和核周的共定位。修改后的方法与随后的其他免疫过氧化物酶步骤或荧光染料标记试剂结合进行了探索。核抗原（BrdU、c-Fos 和 Prox-1）首先用 DAB 聚合物显像，然后用 SSGI 处理，把存款变黑。此后，用另一种免疫过氧化物酶再次使用 DAB 或免疫荧光标记检测细胞质抗原（双皮质素、神经元核和钙结合蛋白）。在这两种方法中，即使在低放大倍数下，也可以轻松区分免疫阳性细胞核和细胞质位点。不同的屏蔽或洗脱后处理比较了连续乙酰胆碱酯酶组织化学，在相同的切片中以 DAB 发展和免疫组织化学终止。总之，我们推荐 DAB 后处理，消除检测系统之间的相互作用，并允许在各种条件下明确区分两种信号：和钙结合蛋白）用另一种免疫过氧化物酶再次使用 DAB 或免疫荧光标记检测。在这两种方法中，即使在低放大倍数下，也可以轻松区分免疫阳性细胞核和细胞质位点。不同的屏蔽或洗脱后处理比较了连续乙酰胆碱酯酶组织化学，在相同的切片中以 DAB 发展和免疫组织化学终止。总之，我们推荐 DAB 后处理，消除检测系统之间的相互作用，并允许在各种条件下明确区分两种信号：和钙结合蛋白）用另一种免疫过氧化物酶再次使用 DAB 或免疫荧光标记检测。在这两种方法中，即使在低放大倍数下，也可以轻松区分免疫阳性细胞核和细胞质位点。不同的屏蔽或洗脱后处理比较了连续乙酰胆碱酯酶组织化学，在相同的切片中以 DAB 发展和免疫组织化学终止。总之，我们推荐 DAB 后处理，消除检测系统之间的相互作用，并允许在各种条件下明确区分两种信号：不同的屏蔽或洗脱后处理比较了连续乙酰胆碱酯酶组织化学，在相同的切片中以 DAB 发展和免疫组织化学终止。总之，我们推荐 DAB 后处理，消除检测系统之间的相互作用，并允许在各种条件下明确区分两种信号：不同的屏蔽或洗脱后处理比较了连续乙酰胆碱酯酶组织化学，在相同的切片中以 DAB 发展和免疫组织化学终止。总之，我们推荐 DAB 后处理，消除检测系统之间的相互作用，并允许在各种条件下明确区分两种信号：