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Quantitative 99mTc Labeling Kit for HYNIC-Conjugated Single Chain Antibody Fragments Targeting Malignant Mesothelioma.
Bioconjugate Chemistry ( IF 4.0 ) Pub Date : 2020-07-06 , DOI: 10.1021/acs.bioconjchem.0c00319 Jiang He 1, 2 , Jinjin Feng 2 , Yang Su 3 , Youngho Seo 2, 4 , Bin Liu 3, 4
Bioconjugate Chemistry ( IF 4.0 ) Pub Date : 2020-07-06 , DOI: 10.1021/acs.bioconjchem.0c00319 Jiang He 1, 2 , Jinjin Feng 2 , Yang Su 3 , Youngho Seo 2, 4 , Bin Liu 3, 4
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Single chain antibody fragment (scFv) is a promising agent for imaging and targeted therapy. The objective of the study is to evaluate a kit formulation for 99mTc labeling of scFv for tumor imaging. The scFv was engineered to contain a cysteine tag to accommodate the specific conjugation of HYNIC and subsequent 99mTc labeling. The labeling conditions were formulated to allow instantaneous one-pot quantitative labeling. The reproducibility of labeling was evaluated at various time points during kit storage at −20 °C. In vitro cell binding experiments and HPLC analysis were performed to assess binding affinity and radiolabel stability, respectively. In vivo tumor targeting study was performed in xenograft models with biodistribution studied at 1, 3, and 24 h post-injection. The optimized kit with 5 μg SnF2, pH 5.5, and 50 μg GH along with as low as 15 μg of HYNIC-cys-scFv provided high labeling yield (>95%), high specific activity (1.8 × 107 Ci/Mol), and robust reproducibility with shelf life up to 90 days when stored at −20 °C. The in vitro cell binding study showed the labeled scFv maintained the binding capability with an apparent KD of ∼27 nM. The animal study using tumor-bearing mice showed high tumor uptake at 16.9%ID/g 24 h post-injection along with rapid blood clearance (0.18%ID/g) and kidney excretion (44%ID/g), resulting in very high contrast (tumor/muscle >200:1). A kit formulation for 99mTc labeling of scFvs targeting mesothelioma was developed based on specific HYNIC conjugation and GH (Glucoheptonate) as a coligand, producing not only high specific activity, but also improved tumor uptake. This convenient one-pot labeling method has the potential for translation into clinical use and is applicable to other scFvs as well.
中文翻译：
用于针对恶性间皮瘤的 HYNIC 偶联单链抗体片段的定量 99mTc 标记试剂盒。
单链抗体片段 (scFv) 是一种很有前途的成像和靶向治疗药物。该研究的目的是评估用于肿瘤成像的99m Tc 标记 scFv 的试剂盒配方。scFv 被设计为包含一个半胱氨酸标签，以适应 HYNIC 和随后的99m的特异性结合锝标签。制定标记条件以允许瞬时一锅定量标记。在 -20 °C 下试剂盒储存期间的不同时间点评估标记的重现性。进行体外细胞结合实验和 HPLC 分析以分别评估结合亲和力和放射性标记稳定性。在异种移植模型中进行体内肿瘤靶向研究，并在注射后 1、3 和 24 小时研究生物分布。含有 5 μg SnF 2、pH 5.5 和 50 μg GH 以及低至 15 μg 的 HYNIC-cys-scFv 的优化试剂盒提供了高标记产率 (>95%)、高比活性 (1.8 × 10 7Ci/Mol)，并且在 -20 °C 下储存时具有强大的重现性，保质期长达 90 天。体外细胞结合研究表明，标记的 scFv 保持结合能力，表观K D约为 27 nM。使用荷瘤小鼠进行的动物研究显示，注射后 24 小时肿瘤吸收率高达 16.9% ID/g，同时血液快速清除 (0.18% ID/g) 和肾脏排泄 (44% ID/g)，导致非常高的对比（肿瘤/肌肉>200:1）。99m套件配方靶向间皮瘤的 scFv 的 Tc 标记是基于特异性 HYNIC 缀合和 GH（葡庚糖酸盐）作为配体开发的，不仅产生高比活性，而且提高了肿瘤吸收。这种方便的一锅标记方法具有转化为临床应用的潜力，也适用于其他 scFv。
更新日期：2020-07-15
中文翻译：
用于针对恶性间皮瘤的 HYNIC 偶联单链抗体片段的定量 99mTc 标记试剂盒。
单链抗体片段 (scFv) 是一种很有前途的成像和靶向治疗药物。该研究的目的是评估用于肿瘤成像的99m Tc 标记 scFv 的试剂盒配方。scFv 被设计为包含一个半胱氨酸标签，以适应 HYNIC 和随后的99m的特异性结合锝标签。制定标记条件以允许瞬时一锅定量标记。在 -20 °C 下试剂盒储存期间的不同时间点评估标记的重现性。进行体外细胞结合实验和 HPLC 分析以分别评估结合亲和力和放射性标记稳定性。在异种移植模型中进行体内肿瘤靶向研究，并在注射后 1、3 和 24 小时研究生物分布。含有 5 μg SnF 2、pH 5.5 和 50 μg GH 以及低至 15 μg 的 HYNIC-cys-scFv 的优化试剂盒提供了高标记产率 (>95%)、高比活性 (1.8 × 10 7Ci/Mol)，并且在 -20 °C 下储存时具有强大的重现性，保质期长达 90 天。体外细胞结合研究表明，标记的 scFv 保持结合能力，表观K D约为 27 nM。使用荷瘤小鼠进行的动物研究显示，注射后 24 小时肿瘤吸收率高达 16.9% ID/g，同时血液快速清除 (0.18% ID/g) 和肾脏排泄 (44% ID/g)，导致非常高的对比（肿瘤/肌肉>200:1）。99m套件配方靶向间皮瘤的 scFv 的 Tc 标记是基于特异性 HYNIC 缀合和 GH（葡庚糖酸盐）作为配体开发的，不仅产生高比活性，而且提高了肿瘤吸收。这种方便的一锅标记方法具有转化为临床应用的潜力，也适用于其他 scFv。
京公网安备 11010802027423号