2-Aminobenzoic acid (2-AA) is widely used as a labeling reagent to derivatize released N-glycans at their free reducing terminus by reductive amination. 2-AA-labeled glycans have increased mass spectrometric sensitivity for their identification and enable fluorescence-chromatography-based glycan quantification. Drawbacks are that the labeling process is labor intensive and time consuming. Clean up of labeled glycans via removal of excess of labeling reagents often leads to sample losses. Here, we report use of 2-AA for labeling N-glycans on a MALDI target through nonreductive amination, while simultaneously functioning as a matrix in MALDI-MS glycan analysis. Coupling 2-AA to glycans results in significant increases of glycan anionic signals as compared to that using the traditional 2,5-dihydroxybenzoic acid (2,5-DHB) matrix. The on-MALDI-target sample preparation is a single-step protocol with high derivatization efficiency. It is also noticed that 2-AA-labeled glycan generated dominant deprotonated molecular anions with much fewer and low-intensity sodium adducts and therefore greatly simplified glycan profiles. We further explored its application in the N-glycan profile of a biotherapeutic monoclonal antibody and was able to achieve sensitive glycan identification at a low microgram level of glycoprotein. This 2-AA on-MALDI-target glycan derivatization eliminates tedious sample preparation and avoids sample loss. It is generally applicable for other applications (e.g., glycomics), where limited amounts of glycoproteins are available for analysis.

中文翻译：

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2-氨基苯甲酸在MALDI靶上进行N-聚糖非还原胺化。

2-氨基苯甲酸（2-AA）被广泛用作标记试剂，通过还原胺化作用使释放的N-聚糖在其自由还原端衍生化。2-AA标记的聚糖对它们的鉴定具有更高的质谱灵敏度，并使基于荧光色谱的聚糖定量成为可能。缺点是贴标过程需要大量劳力和时间。通过去除过量的标记试剂来清除标记的聚糖通常会导致样品流失。在这里，我们报告使用2-AA通过非还原胺化在MALDI目标上标记N-聚糖，同时在MALDI-MS聚糖分析中用作基质。与使用传统的2,5-二羟基苯甲酸（2,5-DHB）基质相比，将2-AA偶联到聚糖上可显着增加聚糖阴离子信号。MALDI上的目标样品制备是具有高衍生化效率的单步操作方案。还应注意的是，2-AA标记的聚糖生成的去质子化分子阴离子占主导地位，而钠加合物的数量少得多且强度低，因此大大简化了聚糖谱。我们进一步探索了其在生物治疗性单克隆抗体的N-聚糖谱中的应用，并能够在低微克糖蛋白水平上实现灵敏的聚糖鉴定。这种2-AA对MALDI的目标聚糖衍生化消除了繁琐的样品制备过程，并避免了样品流失。它通常适用于其他应用程序（例如糖组学），其中有限量的糖蛋白可用于分析。还应注意的是，2-AA标记的聚糖生成的去质子化分子阴离子占主导地位，而钠加合物的数量少得多且强度低，因此大大简化了聚糖谱。我们进一步探索了其在生物治疗性单克隆抗体的N-聚糖谱中的应用，并能够在低微克糖蛋白水平上实现灵敏的聚糖鉴定。这种2-AA对MALDI的目标聚糖衍生化消除了繁琐的样品制备过程，并避免了样品流失。它通常适用于其他应用程序（例如糖组学），其中有限量的糖蛋白可用于分析。还应注意的是，2-AA标记的聚糖生成的去质子化分子阴离子占主导地位，而钠加合物的数量少得多且强度低，因此大大简化了聚糖谱。我们进一步探索了其在生物治疗性单克隆抗体的N-聚糖谱中的应用，并能够在低微克糖蛋白水平上实现灵敏的聚糖鉴定。这种2-AA对MALDI的目标聚糖衍生化消除了繁琐的样品制备过程，并避免了样品流失。它通常适用于其他应用程序（例如糖组学），其中有限量的糖蛋白可用于分析。我们进一步探索了其在生物治疗性单克隆抗体的N-聚糖谱中的应用，并能够在低微克糖蛋白水平上实现灵敏的聚糖鉴定。这种2-AA对MALDI的目标聚糖衍生化消除了繁琐的样品制备过程，并避免了样品流失。它通常适用于其他应用程序（例如糖组学），其中有限量的糖蛋白可用于分析。我们进一步探索了其在生物治疗性单克隆抗体的N-聚糖谱中的应用，并能够在低微克糖蛋白水平上实现灵敏的聚糖鉴定。这种2-AA对MALDI的目标聚糖衍生化消除了繁琐的样品制备过程，并避免了样品流失。它通常适用于其他应用程序（例如糖组学），其中有限量的糖蛋白可用于分析。