In Trypanosoma brucei, mitochondrial pre-mRNAs undergo 3′-5′ exonucleolytic processing, 3′ adenylation and uridylation, 5′ pyrophosphate removal, and, often, U-insertion/deletion editing. The 3′ modifications are modulated by pentatricopeptide repeat (PPR) Kinetoplast Polyadenylation Factors (KPAFs). We have shown that KPAF3 binding to the 3′ region stabilizes properly trimmed transcripts and stimulates their A-tailing by KPAP1 poly(A) polymerase. Conversely, poly(A) binding KPAF4 shields the nascent A-tail from uridylation and decay thereby protecting pre-mRNA upon KPAF3 displacement by editing. While editing concludes in the 5′ region, KPAF1/2 dimer induces A/U-tailing to activate translation. Remarkably, 5′ end recognition and pyrophosphate hydrolysis by the PPsome complex also contribute to mRNA stabilization. Here, we demonstrate that KPAF4 functions as a heterodimer with KPAF5, a protein lacking discernable motifs. We show that KPAF5 stabilizes KPAF4 to enable poly(A) tail recognition, which likely leads to mRNA stabilization during the editing process and impedes spontaneous translational activation of partially-edited transcripts. Thus, KPAF4/5 represents a poly(A) binding element of the mitochondrial polyadenylation complex. We present evidence that RNA editing substrate binding complex bridges the 5′ end-bound PPsome and 3′ end-bound polyadenylation complexes. This interaction may enable mRNA circularization, an apparently critical element of mitochondrial mRNA stability and quality control.

中文翻译：

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Poly(A) 结合 KPAF4/5 复合物可稳定布氏锥虫中的运动质体 mRNA。

在布氏锥虫, 线粒体前 mRNAs 经历 3'-5' 核酸外切加工、3' 腺苷酸化和尿苷酸化、5' 焦磷酸去除，以及通常的 U 插入/缺失编辑。3' 修饰受五肽重复 (PPR) 动质体多腺苷酸化因子 (KPAF) 调节。我们已经证明，KPAF3 与 3' 区域的结合可以稳定适当修剪的转录物，并通过 KPAP1 多聚（A）聚合酶刺激它们的 A 加尾。相反，poly(A) 结合 KPAF4 保护新生 A 尾免受尿苷酸化和衰变，从而通过编辑在 KPAF3 置换时保护前 mRNA。当编辑在 5' 区域结束时，KPAF1/2 二聚体诱导 A/U 加尾以激活翻译。值得注意的是，PPsome 复合物的 5' 末端识别和焦磷酸水解也有助于 mRNA 稳定。这里，我们证明 KPAF4 与 KPAF5 的异二聚体发挥作用，KPAF5 是一种缺乏可识别基序的蛋白质。我们显示 KPAF5 稳定 KPAF4 以启用 poly(A) 尾识别，这可能导致编辑过程中的 mRNA 稳定并阻碍部分编辑的转录本的自发翻译激活。因此，KPAF4/5 代表线粒体多腺苷酸化复合物的 poly(A) 结合元件。我们提出的证据表明，RNA 编辑底物结合复合物桥接了 5' 末端结合的 PPsome 和 3' 末端结合的多腺苷酸化复合物。这种相互作用可能使 mRNA 环化成为线粒体 mRNA 稳定性和质量控制的关键因素。这可能导致编辑过程中的 mRNA 稳定，并阻碍部分编辑的转录本的自发翻译激活。因此，KPAF4/5 代表线粒体多腺苷酸化复合物的 poly(A) 结合元件。我们提出的证据表明，RNA 编辑底物结合复合物桥接了 5' 末端结合的 PPsome 和 3' 末端结合的多腺苷酸化复合物。这种相互作用可能使 mRNA 环化成为线粒体 mRNA 稳定性和质量控制的关键因素。这可能导致编辑过程中的 mRNA 稳定，并阻碍部分编辑的转录本的自发翻译激活。因此，KPAF4/5 代表线粒体多腺苷酸化复合物的 poly(A) 结合元件。我们提出的证据表明，RNA 编辑底物结合复合物桥接了 5' 末端结合的 PPsome 和 3' 末端结合的多腺苷酸化复合物。这种相互作用可能使 mRNA 环化成为线粒体 mRNA 稳定性和质量控制的关键因素。我们提出的证据表明，RNA 编辑底物结合复合物桥接了 5' 末端结合的 PPsome 和 3' 末端结合的多腺苷酸化复合物。这种相互作用可能使 mRNA 环化成为线粒体 mRNA 稳定性和质量控制的关键因素。我们提出的证据表明，RNA 编辑底物结合复合物桥接了 5' 末端结合的 PPsome 和 3' 末端结合的多腺苷酸化复合物。这种相互作用可能使 mRNA 环化成为线粒体 mRNA 稳定性和质量控制的关键因素。