BACKGROUND:Stable transformation, transient expression, and post-transcriptional gene silencing (PTGS) are powerful methodologies that allow exploration of gene function. OBJECTIVE:We aimed to apply these methodologies to strawberry leaves. Methods: the binary vectors pBIN19-sgfp, pBICdsGFP and pBIN61-P19 were transferred into A. tumefaciens EHA105 supervirulent strain by electroporation. The sgfp gene silencing was carried out in stably transformed GFP (green fluorescent protein) F. x ananassa Duch. cultivar ‘Pájaro’ strawberry plants by agroinfiltration. GFP-fluorescence was observed using a stereomicroscope (507 nm). RESULTS:We attained a GFP transgenic F. x ananassa plant that expresses the functional protein in all the tissues during a complete and normal life cycle. In planta sgfp transient expression and silencing have also been achieved in F. x ananassa cv. ‘Pájaro’ leaves of wild type and GFP transgenic plants, respectively. Agrobacterium-mediated transient expression was visualized as high intensity green fluorescent spots as early as 7 days post-agroinfiltration (dpa), peaking between 10 and 14 dpa and persisting as long as 24 dpa. A knockdown GFP phenotype was achieved by silencing using a dsGFP hairpin. CONCLUSION:This work contributes significantly to the reverse genetics field in strawberry, might help to gain knowledge in the analysis of functional promoters and thereby allow protein expression and silencing of genes. This will help to develop resistant plants expressing plant defense elicitors or silencing pathogen receptors and/or negative regulators of plant defense.

中文翻译：

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草莓中的GFP瞬时表达和沉默

背景：稳定的转化，瞬时表达和转录后基因沉默（PTGS）是允许探索基因功能的强大方法。目的：我们旨在将这些方法应用于草莓叶。方法：通过电穿孔法将二元载体pBIN19-sgfp，pBICdsGFP和pBIN61-P19转移到根癌农杆菌EHA105超高毒菌株中。sgfp基因沉默是在稳定转化的GFP（绿色荧光蛋白）F。x ananassa Duch中进行的。通过农杆菌浸润培育'Pájaro'草莓品种。使用立体显微镜（507nm）观察到GFP荧光。结果：我们获得了一个GFP转基因南美白对虾植物，该植物在完整和正常的生命周期中在所有组织中表达功能蛋白。在植物中sgfp在F. xananassa cv中也实现了瞬时表达和沉默。野生型和GFP转基因植物的'Pájaro'叶。农杆菌介导的瞬时表达最早在农杆菌浸润（dpa）后7天可视化为高强度绿色荧光点，在10 dpa至14 dpa之间达到峰值，并持续长达24 dpa。通过使用dsGFP发夹进行沉默，可实现击倒的GFP表型。结论：这项工作为草莓反向遗传学领域的发展做出了重要贡献，可能有助于了解功能启动子的知识，从而使蛋白质表达和基因沉默成为可能。这将有助于开发表达植物防御诱导剂或沉默病原体受体和/或植物防御负调节剂的抗性植物。野生型和GFP转基因植物的'Pájaro'叶。农杆菌介导的瞬时表达最早在农杆菌浸润（dpa）后7天可视化为高强度绿色荧光点，在10 dpa至14 dpa之间达到峰值，并持续长达24 dpa。通过使用dsGFP发夹进行沉默，可实现击倒的GFP表型。结论：这项工作为草莓反向遗传学领域的发展做出了重要贡献，可能有助于了解功能启动子的知识，从而使蛋白质表达和基因沉默成为可能。这将有助于开发表达植物防御诱导子或沉默病原体受体和/或植物防御负调节剂的抗性植物。野生型和GFP转基因植物的'Pájaro'叶。农杆菌介导的瞬时表达最早在农杆菌浸润（dpa）后7天可视化为高强度绿色荧光点，在10 dpa至14 dpa之间达到峰值，并持续长达24 dpa。通过使用dsGFP发夹进行沉默来实现GFP基因敲低的表型。结论：这项工作为草莓反向遗传学领域的发展做出了重要贡献，可能有助于了解功能启动子的知识，从而使蛋白质表达和基因沉默成为可能。这将有助于开发表达植物防御诱导子或沉默病原体受体和/或植物防御负调节剂的抗性植物。农杆菌介导的瞬时表达最早在农杆菌浸润（dpa）后7天可视化为高强度绿色荧光点，在10 dpa至14 dpa之间达到峰值，并持续长达24 dpa。通过使用dsGFP发夹进行沉默，可实现击倒的GFP表型。结论：这项工作为草莓反向遗传学领域的发展做出了重要贡献，可能有助于了解功能启动子的知识，从而使蛋白质表达和基因沉默成为可能。这将有助于开发表达植物防御诱导剂或沉默病原体受体和/或植物防御负调节剂的抗性植物。农杆菌介导的瞬时表达最早在农杆菌浸润（dpa）后7天可视化为高强度绿色荧光点，在10 dpa至14 dpa之间达到峰值，并持续长达24 dpa。通过使用dsGFP发夹进行沉默，可实现击倒的GFP表型。结论：这项工作为草莓反向遗传学领域的发展做出了重要贡献，可能有助于了解功能启动子的知识，从而使蛋白质表达和基因沉默成为可能。这将有助于开发表达植物防御诱导子或沉默病原体受体和/或植物防御负调节剂的抗性植物。通过使用dsGFP发夹进行沉默，可实现击倒的GFP表型。结论：这项工作为草莓反向遗传学领域的发展做出了重要贡献，可能有助于了解功能启动子的知识，从而使蛋白质表达和基因沉默成为可能。这将有助于开发表达植物防御诱导子或沉默病原体受体和/或植物防御负调节剂的抗性植物。通过使用dsGFP发夹进行沉默来实现GFP基因敲低的表型。结论：这项工作为草莓反向遗传学领域的发展做出了重要贡献，可能有助于了解功能启动子的知识，从而使蛋白质表达和基因沉默成为可能。这将有助于开发表达植物防御诱导子或沉默病原体受体和/或植物防御负调节剂的抗性植物。