Lipid A is a major compound of the outer membrane of gram‐negative bacteria and is a key factor of bacterial virulence. As lipid A's structure differs among bacterial species and varies between strains of the same species, knowing its modifications is essential to understand its implications in the infectious process. To analyze these lipids, matrix‐assisted laser desorption ionization‐mass spectrometry (MALDI‐MS) is a well‐suited method that is fast and efficient. However, there are limitations with the matrix and additives used, such as the suppression of signal or prompt fragmentations that could give a false overview of lipid A composition in biological samples. For a comprehensive analysis of the entire lipid A species present in a sample, we tested 16 matrices and 11 additives on two commercial lipids A. The first commercial one contains single phosphorylation group, and the second contains two phosphorylation and two ketodeoxyoctonic acid (KDO) groups. The lipid A containing KDO groups was essentially detected by the 3‐hydroxypicolinic acid (3‐HPA) matrix, whereas the monophosphorylated lipid A could be detected by 13 matrices out of the 16. We also demonstrated that the signal of diphosphorylated lipid A can be enhanced with the use of additives in the matrix. Our study indicated that the best conditions to obtain a clear signal of both lipids A without prompt fragmentation was the use of 3‐HPA with 10mM trifluoroacetic acid (TFA).

中文翻译：

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基质和添加剂对磷酸化和酮脱氧辛酸脂质的影响基质辅助激光解吸电离质谱分析。

脂质A是革兰氏阴性细菌外膜的主要成分，并且是细菌毒性的关键因素。由于脂质A的结构在细菌物种之间不同，并且在同一物种的菌株之间也不同，因此了解其修饰对于了解其在感染过程中的意义至关重要。为了分析这些脂质，基质辅助激光解吸电离质谱（MALDI-MS）是一种非常适合的方法，该方法快速有效。但是，所使用的基质和添加剂存在局限性，例如信号抑制或迅速断裂，可能会错误地概述生物样品中的脂质A成分。为了全面分析样品中存在的全部脂质A种类，我们在两种商业脂质A上测试了16种基质和11种添加剂。第一个商品含有一个磷酸化基团，第二个商品含有两个磷酸化基团和两个酮脱氧辛酸（KDO）基团。含有KDO基团的脂质A基本上是通过3-羟基吡啶甲酸（3-HPA）基质检测的，而单磷酸化脂质A可以通过16种基质中的13种基质检测到。我们还证明了二磷酸化脂质A的信号可以被通过在基质中使用添加剂来增强效果。我们的研究表明，在没有迅速裂解的情况下获得两种脂质A的清晰信号的最佳条件是将3-HPA与10mM三氟乙酸（TFA）结合使用。含有KDO基团的脂质A基本上是通过3-羟基吡啶甲酸（3-HPA）基质检测的，而单磷酸化脂质A可以通过16种基质中的13种基质检测到。我们还证明了二磷酸化脂质A的信号可以被通过在基质中使用添加剂来增强效果。我们的研究表明，在没有迅速裂解的情况下获得两种脂质A清晰信号的最佳条件是将3-HPA与10mM三氟乙酸（TFA）结合使用。含有KDO基团的脂质A基本上是通过3-羟基吡啶甲酸（3-HPA）基质检测到的，而16种基质中的13种可以检测到单磷酸化脂质A。我们还证明了二磷酸化脂质A的信号可以通过在基质中使用添加剂来增强效果。我们的研究表明，在没有迅速裂解的情况下获得两种脂质A清晰信号的最佳条件是将3-HPA与10mM三氟乙酸（TFA）结合使用。