Objectives We evaluated the effects of miR-140-3p on EMT, cellular migration, and invasion in TGF-β1 treated human OS cells. Human fresh OS tissue and normal bone tissue specimens were gathered from 42 patients (29 male and 13 female, 11 to 24 years of age with a mean age of 17.5 ± 2.3 years) diagnosed with OS by pathology. By targeting TRAF6, miR-140-3p inhibits TGF-β1-induced human osteosarcoma epithelial-to-mesenchymal transition, migration, and invasion. Results In this study, we found microRNA (miR)-140-3p to be down-regulated and tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 (TRAF6) to be up-regulated in patient OS samples. Lower levels of miR-140-3p and higher levels of TRAF6 were found in the advanced Enneking stage of OS. Furthermore, both mRNA and protein levels of TRAF6 were negatively associated with miR-140-3p mRNA expression in human OS tissue. TRAF6 was verified as a direct target of miR-140-3p in TGF-β1-treated human U2OS cells. Further, a miR-140-3p mimic dramatically inhibited while a miR-140-3p inhibitor enhanced TGF-β1-induced epithelial-to-mesenchymal transition, migration, and invasion of U2OS cells. Small interfering RNA was found to silence TRAF6 and to partly reverse the effects of the miR-140-3p inhibitor on TGF-β1-treated U2OS cells in vitro. Conclusion These results demonstrate miR-140-3p to function as a tumor inhibitor of human OS cells by decreasing TRAF6 expression. miR-140-3p and TRAF6 may be valuable and novel biomarkers for diagnosis and treatment of OS.

中文翻译：

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通过靶向 TRAF6，miR-140-3p 抑制 TGF-β1 诱导的人骨肉瘤上皮间质转化、迁移和侵袭

目的 我们评估了 miR-140-3p 对 TGF-β1 处理的人类 OS 细胞中 EMT、细胞迁移和侵袭的影响。从病理诊断为 OS 的 42 名患者（29 名男性和 13 名女性，11 至 24 岁，平均年龄为 17.5 ± 2.3 岁）中收集人类新鲜 OS 组织和正常骨组织标本。通过靶向 TRAF6，miR-140-3p 抑制 TGF-β1 诱导的人骨肉瘤上皮间质转化、迁移和侵袭。结果在本研究中，我们发现患者 OS 样本中的 microRNA (miR)-140-3p 下调，而肿瘤坏死因子受体相关因子 6 (TRAF6) 上调。在 OS 的晚期 Enneking 阶段发现了较低水平的 miR-140-3p 和较高水平的 TRAF6。此外，TRAF6 的 mRNA 和蛋白质水平均与人 OS 组织中的 miR-140-3p mRNA 表达呈负相关。TRAF6 被证实是 TGF-β1 处理的人 U2OS 细胞中 miR-140-3p 的直接靶标。此外，miR-140-3p 模拟物显着抑制，而 miR-140-3p 抑制剂增强了 TGF-β1 诱导的 U2OS 细胞的上皮间质转化、迁移和侵袭。发现小干扰 RNA 沉默 TRAF6 并在体外部分逆转 miR-140-3p 抑制剂对 TGF-β1 处理的 U2OS 细胞的影响。结论 这些结果表明 miR-140-3p 通过降低 TRAF6 表达而起到人 OS 细胞的肿瘤抑制剂的作用。miR-140-3p 和 TRAF6 可能是诊断和治疗 OS 的有价值的新型生物标志物。TRAF6 被证实是 TGF-β1 处理的人 U2OS 细胞中 miR-140-3p 的直接靶标。此外，miR-140-3p 模拟物显着抑制，而 miR-140-3p 抑制剂增强了 TGF-β1 诱导的 U2OS 细胞的上皮间质转化、迁移和侵袭。发现小干扰 RNA 沉默 TRAF6 并在体外部分逆转 miR-140-3p 抑制剂对 TGF-β1 处理的 U2OS 细胞的影响。结论 这些结果表明 miR-140-3p 通过降低 TRAF6 表达作为人 OS 细胞的肿瘤抑制剂起作用。miR-140-3p 和 TRAF6 可能是诊断和治疗 OS 的有价值的新型生物标志物。TRAF6 被证实是 TGF-β1 处理的人 U2OS 细胞中 miR-140-3p 的直接靶标。此外，miR-140-3p 模拟物显着抑制，而 miR-140-3p 抑制剂增强了 TGF-β1 诱导的 U2OS 细胞的上皮间质转化、迁移和侵袭。发现小干扰 RNA 沉默 TRAF6 并在体外部分逆转 miR-140-3p 抑制剂对 TGF-β1 处理的 U2OS 细胞的影响。结论 这些结果表明 miR-140-3p 通过降低 TRAF6 表达而起到人 OS 细胞的肿瘤抑制剂的作用。miR-140-3p 和 TRAF6 可能是诊断和治疗 OS 的有价值的新型生物标志物。发现小干扰 RNA 沉默 TRAF6 并在体外部分逆转 miR-140-3p 抑制剂对 TGF-β1 处理的 U2OS 细胞的影响。结论 这些结果表明 miR-140-3p 通过降低 TRAF6 表达而起到人 OS 细胞的肿瘤抑制剂的作用。miR-140-3p 和 TRAF6 可能是诊断和治疗 OS 的有价值的新型生物标志物。发现小干扰 RNA 沉默 TRAF6 并在体外部分逆转 miR-140-3p 抑制剂对 TGF-β1 处理的 U2OS 细胞的影响。结论 这些结果表明 miR-140-3p 通过降低 TRAF6 表达而起到人 OS 细胞的肿瘤抑制剂的作用。miR-140-3p 和 TRAF6 可能是诊断和治疗 OS 的有价值的新型生物标志物。