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EZH2 expression and its role in spermatogonial stem cell self-renewal in goats
Theriogenology ( IF 2.4 ) Pub Date : 2020-10-01 , DOI: 10.1016/j.theriogenology.2020.06.013 Yu Cai 1 , Mingtian Deng 1 , Zifei Liu 1 , Guomin Zhang 1 , Jing Pang 2 , Shiyu An 1 , Zhibo Wang 1 , Yanli Zhang 1 , Feng Wang 1
Theriogenology ( IF 2.4 ) Pub Date : 2020-10-01 , DOI: 10.1016/j.theriogenology.2020.06.013 Yu Cai 1 , Mingtian Deng 1 , Zifei Liu 1 , Guomin Zhang 1 , Jing Pang 2 , Shiyu An 1 , Zhibo Wang 1 , Yanli Zhang 1 , Feng Wang 1
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Enhancer of zeste homolog 2 (EZH2) is a histone H3 lysine 27 (H3K27) methyltransferase that plays vital roles in mouse spermatogenesis. However, the expression pattern and role of EZH2 in goat spermatogonial stem cells (SSCs) is unknown. In the present study, we investigated EZH2 expression in the testis of postpubertal goats and its effect on the biological characteristics of goat SSCs. We found that EZH2 mRNA (P < 0.01) and protein (P < 0.05) expression was increased in the testes of postpubertal goats compared to that of prepubertal goats. Moreover, EZH2 was more highly expressed in goat SSCs than in Leydig cells (P < 0.01) and Sertoli cells (P < 0.01) as determined by qPCR, Western blot, and immunofluorescence. Compared to a negative control (NC), cell proliferation (P < 0.01) and viability (P < 0.01) were decreased in SSCs in which EZH2 was knocked down, and the G2/M phase of the cell cycle was blocked (P < 0.01), as determined by Edu staining, CCK-8 assay, and flow cytometry analysis. Additionally, the expression of CASP3, CASP9, and BAX was significantly increased (P < 0.01) while BCL2 expression was decreased (P < 0.01) in EZH2 knockdown SSCs. Notably, the expression of GDNF, a SSCs marker gene, and DAZL, a spermatogenesis-related gene, were significantly decreased (P < 0.01) while GFRA1 expression was significantly up-regulated (P < 0.01) in EZH2 knockdown SSCs. Our data suggest that EZH2 plays a pivotal role in the self-renewal of goat SSCs, and knockdown of EZH2 might impair spermatogenesis in goats.
中文翻译：
EZH2表达及其在山羊精原干细胞自我更新中的作用
zeste 同源物 2 (EZH2) 增强子是一种组蛋白 H3 赖氨酸 27 (H3K27) 甲基转移酶，在小鼠精子发生中起重要作用。然而，EZH2 在山羊精原干细胞 (SSC) 中的表达模式和作用尚不清楚。在本研究中，我们研究了 EZH2 在青春期后山羊睾丸中的表达及其对山羊 SSCs 生物学特性的影响。我们发现，与青春期前山羊相比，青春期后山羊睾丸中 EZH2 mRNA (P < 0.01) 和蛋白质 (P < 0.05) 的表达增加。此外，通过 qPCR、蛋白质印迹和免疫荧光检测，EZH2 在山羊 SSC 中的表达高于 Leydig 细胞 (P < 0.01) 和支持细胞 (P < 0.01)。与阴性对照 (NC) 相比，细胞增殖 (P < 0.01) 和活力 (P < 0. 经 Edu 染色、CCK-8 测定和流式细胞术分析确定，敲除 EZH2 且细胞周期 G2/M 期受阻的 SSC 中 01) 减少（P < 0.01）。此外，在 EZH2 敲低的 SSC 中，CASP3、CASP9 和 BAX 的表达显着增加（P < 0.01），而 BCL2 表达降低（P < 0.01）。值得注意的是，在 EZH2 敲低的 SSC 中，SSCs 标记基因 GDNF 和精子发生相关基因 DAZL 的表达显着降低（P < 0.01），而 GFRA1 表达显着上调（P < 0.01）。我们的数据表明，EZH2 在山羊 SSC 的自我更新中起关键作用，而 EZH2 的敲低可能会损害山羊的精子发生。通过 Edu 染色、CCK-8 测定和流式细胞术分析确定。此外，在 EZH2 敲低的 SSC 中，CASP3、CASP9 和 BAX 的表达显着增加（P < 0.01），而 BCL2 表达降低（P < 0.01）。值得注意的是，在 EZH2 敲低的 SSC 中，SSCs 标记基因 GDNF 和精子发生相关基因 DAZL 的表达显着降低（P < 0.01），而 GFRA1 表达显着上调（P < 0.01）。我们的数据表明，EZH2 在山羊 SSC 的自我更新中起关键作用，而 EZH2 的敲低可能会损害山羊的精子发生。通过 Edu 染色、CCK-8 测定和流式细胞术分析确定。此外，在 EZH2 敲低的 SSC 中，CASP3、CASP9 和 BAX 的表达显着增加（P < 0.01），而 BCL2 表达降低（P < 0.01）。值得注意的是，在 EZH2 敲低的 SSC 中，SSCs 标记基因 GDNF 和精子发生相关基因 DAZL 的表达显着降低（P < 0.01），而 GFRA1 表达显着上调（P < 0.01）。我们的数据表明，EZH2 在山羊 SSC 的自我更新中起关键作用，而 EZH2 的敲低可能会损害山羊的精子发生。在 EZH2 敲低的 SSCs 中，SSCs 标记基因 GDNF 和精子发生相关基因 DAZL 的表达显着降低（P < 0.01），而 GFRA1 表达显着上调（P < 0.01）。我们的数据表明，EZH2 在山羊 SSC 的自我更新中起关键作用，而 EZH2 的敲低可能会损害山羊的精子发生。在 EZH2 敲低的 SSCs 中，SSCs 标记基因 GDNF 和精子发生相关基因 DAZL 的表达显着降低（P < 0.01），而 GFRA1 表达显着上调（P < 0.01）。我们的数据表明，EZH2 在山羊 SSC 的自我更新中起关键作用，而 EZH2 的敲低可能会损害山羊的精子发生。
更新日期：2020-10-01
中文翻译：
EZH2表达及其在山羊精原干细胞自我更新中的作用
zeste 同源物 2 (EZH2) 增强子是一种组蛋白 H3 赖氨酸 27 (H3K27) 甲基转移酶，在小鼠精子发生中起重要作用。然而，EZH2 在山羊精原干细胞 (SSC) 中的表达模式和作用尚不清楚。在本研究中，我们研究了 EZH2 在青春期后山羊睾丸中的表达及其对山羊 SSCs 生物学特性的影响。我们发现，与青春期前山羊相比，青春期后山羊睾丸中 EZH2 mRNA (P < 0.01) 和蛋白质 (P < 0.05) 的表达增加。此外，通过 qPCR、蛋白质印迹和免疫荧光检测，EZH2 在山羊 SSC 中的表达高于 Leydig 细胞 (P < 0.01) 和支持细胞 (P < 0.01)。与阴性对照 (NC) 相比，细胞增殖 (P < 0.01) 和活力 (P < 0. 经 Edu 染色、CCK-8 测定和流式细胞术分析确定，敲除 EZH2 且细胞周期 G2/M 期受阻的 SSC 中 01) 减少（P < 0.01）。此外，在 EZH2 敲低的 SSC 中，CASP3、CASP9 和 BAX 的表达显着增加（P < 0.01），而 BCL2 表达降低（P < 0.01）。值得注意的是，在 EZH2 敲低的 SSC 中，SSCs 标记基因 GDNF 和精子发生相关基因 DAZL 的表达显着降低（P < 0.01），而 GFRA1 表达显着上调（P < 0.01）。我们的数据表明，EZH2 在山羊 SSC 的自我更新中起关键作用，而 EZH2 的敲低可能会损害山羊的精子发生。通过 Edu 染色、CCK-8 测定和流式细胞术分析确定。此外，在 EZH2 敲低的 SSC 中，CASP3、CASP9 和 BAX 的表达显着增加（P < 0.01），而 BCL2 表达降低（P < 0.01）。值得注意的是，在 EZH2 敲低的 SSC 中，SSCs 标记基因 GDNF 和精子发生相关基因 DAZL 的表达显着降低（P < 0.01），而 GFRA1 表达显着上调（P < 0.01）。我们的数据表明，EZH2 在山羊 SSC 的自我更新中起关键作用，而 EZH2 的敲低可能会损害山羊的精子发生。通过 Edu 染色、CCK-8 测定和流式细胞术分析确定。此外，在 EZH2 敲低的 SSC 中，CASP3、CASP9 和 BAX 的表达显着增加（P < 0.01），而 BCL2 表达降低（P < 0.01）。值得注意的是，在 EZH2 敲低的 SSC 中，SSCs 标记基因 GDNF 和精子发生相关基因 DAZL 的表达显着降低（P < 0.01），而 GFRA1 表达显着上调（P < 0.01）。我们的数据表明，EZH2 在山羊 SSC 的自我更新中起关键作用，而 EZH2 的敲低可能会损害山羊的精子发生。在 EZH2 敲低的 SSCs 中，SSCs 标记基因 GDNF 和精子发生相关基因 DAZL 的表达显着降低（P < 0.01），而 GFRA1 表达显着上调（P < 0.01）。我们的数据表明，EZH2 在山羊 SSC 的自我更新中起关键作用，而 EZH2 的敲低可能会损害山羊的精子发生。在 EZH2 敲低的 SSCs 中，SSCs 标记基因 GDNF 和精子发生相关基因 DAZL 的表达显着降低（P < 0.01），而 GFRA1 表达显着上调（P < 0.01）。我们的数据表明，EZH2 在山羊 SSC 的自我更新中起关键作用，而 EZH2 的敲低可能会损害山羊的精子发生。
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