Lung surfactant accumulates in the lamellar body (LB) via not only the secretory (anterograde) pathway but also the endocytic (retrograde) pathway. Our previous studies suggested that the major surfactant components, phosphatidylcholine and surfactant protein A take independent trafficking routes in alveolar type II cells. Thus, trafficking of surfactant protein B (SP-B), a major hydrophobic surfactant apoprotein, should be re-evaluated by a straightforward method. Radiolabeling of cells and subsequent cell fractionation were employed to pursue the sequential trafficking of newly synthesized SP-B in rabbit alveolar type II cells. The LB fraction was prepared by gradient ultracentrifugation. Immunoprecipitation from the culture medium, total cells, and LB fraction was carried out with anti-SP-B antibody. Newly synthesized [35S]-pro-SP-B (~ 42 kDa) was detected in the cells after 1 h. An ~ 8-kDa mature form of [35S]-SP-B was detected in the cells after 3 h and in the LB after 6 h. Mature [35S]-SP-B was predominant in the cells after 24 h, and the dominant portion was present in the LB. In contrast, only a small amount of mature [35S]-SP-B was present in the culture medium. Molecular processing of ~ 42 kDa [35S]-pro-SP-B and transport to the LB was inhibited by brefeldin A, which disassembles the Golgi apparatus. These results suggest that newly synthesized SP-B is sorted to the LB via the Golgi and stored until exocytosis. This pathway is distinct from the pathways reported for phosphatidylcholine and surfactant protein A.

中文翻译：

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将新合成的表面活性蛋白 B 运输到肺泡 II 型细胞中的层状体

肺表面活性剂不仅通过分泌（顺行）途径而且通过内吞（逆行）途径积聚在层状体（LB）中。我们以前的研究表明，主要的表面活性成分，磷脂酰胆碱和表面活性蛋白 A 在肺泡 II 型细胞中采用独立的运输途径。因此，表面活性剂蛋白 B (SP-B)（一种主要的疏水性表面活性剂载脂蛋白）的运输应通过直接的方法重新评估。细胞的放射性标记和随后的细胞分级被用来追踪新合成的 SP-B 在兔肺泡 II 型细胞中的顺序运输。LB 部分通过梯度超速离心制备。用抗 SP-B 抗体进行培养基、总细胞和 LB 部分的免疫沉淀。1 小时后在细胞中检测到新合成的 [35S]-pro-SP-B (~ 42 kDa)。3 小时后在细胞中和 6 小时后在 LB 中检测到约 8-kDa 成熟形式的 [35S]-SP-B。24小时后成熟的[35S]-SP-B在细胞中占主导地位，主要部分存在于LB中。相比之下，培养基中仅存在少量成熟的 [35S]-SP-B。~ 42 kDa [35S]-pro-SP-B 的分子加工和向 LB 的转运受到 brefeldin A 的抑制，brefeldin A 会分解高尔基体。这些结果表明新合成的 SP-B 通过高尔基体分类到 LB 并储存直到胞吐作用。该途径与报道的磷脂酰胆碱和表面活性蛋白 A 的途径不同。3 小时后在细胞中和 6 小时后在 LB 中检测到约 8-kDa 成熟形式的 [35S]-SP-B。24小时后成熟的[35S]-SP-B在细胞中占主导地位，主要部分存在于LB中。相比之下，培养基中仅存在少量成熟的 [35S]-SP-B。~ 42 kDa [35S]-pro-SP-B 的分子加工和向 LB 的转运受到 brefeldin A 的抑制，brefeldin A 会分解高尔基体。这些结果表明新合成的 SP-B 通过高尔基体分类到 LB 并储存直到胞吐作用。该途径与报道的磷脂酰胆碱和表面活性蛋白 A 的途径不同。3 小时后在细胞中和 6 小时后在 LB 中检测到约 8-kDa 成熟形式的 [35S]-SP-B。24小时后成熟的[35S]-SP-B在细胞中占主导地位，主要部分存在于LB中。相比之下，培养基中仅存在少量成熟的 [35S]-SP-B。~ 42 kDa [35S]-pro-SP-B 的分子加工和向 LB 的转运受到 brefeldin A 的抑制，brefeldin A 会分解高尔基体。这些结果表明新合成的 SP-B 通过高尔基体分类到 LB 并储存直到胞吐作用。该途径与报道的磷脂酰胆碱和表面活性蛋白 A 的途径不同。~ 42 kDa [35S]-pro-SP-B 的分子加工和向 LB 的转运受到 brefeldin A 的抑制，brefeldin A 会分解高尔基体。这些结果表明新合成的 SP-B 通过高尔基体分类到 LB 并储存直到胞吐作用。该途径与报道的磷脂酰胆碱和表面活性蛋白 A 的途径不同。~ 42 kDa [35S]-pro-SP-B 的分子加工和向 LB 的转运受到 brefeldin A 的抑制，brefeldin A 会分解高尔基体。这些结果表明新合成的 SP-B 通过高尔基体分类到 LB 并储存直到胞吐作用。该途径与报道的磷脂酰胆碱和表面活性蛋白 A 的途径不同。