Abstract Fisetin is an important phyto-flavonoid that possesses very good anti-oxidant, anti-Parkinson's and anti-cancer activities. A bioanalytical method was developed and validated for the estimation of fisetin in the rat's plasma using reverse phase ultra-fast liquid chromatography combined with a C-18 reverse phase column. Quercetin was used as an internal standard. The mobile phase was composed of acetonitrile and orthophosphoric acid (0.2% v/v) in the ratio of 30:70 v/v. Flow rate was set at 1 mL/min and chromatogram of both compounds was detected at a wavelength of 362 nm. Protein precipitation method was used to extract drug from plasma samples. The retention times for fisetin and quercetin were found at 8.3 min and 16.9 min, respectively. The developed method was found to be linear in the range of 25–125 ng/mL with regression coefficient (r2) of 0.9996. The method was validated as per the ICH Q2 (R1) guidelines. The percentage recovery was in the range of 95–105%, which indicated that method was accurate. The percentage relative standard deviation was found to be less than 2% which indicates that method was precised. Limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) were found to be 3.18 ng/mL and 9.66 ng/mL, respectively. The developed method was found to be robust as there was no any significant change in response with change in flow rate and composition of mobile phase. Obtained results indicated that the developed method has passed all the validation test parameters and can be applied successfully for estimation of fisetin in the rat plasma.

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反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中非瑟酮的开发与验证

摘要 鱼黄素是一种重要的植物黄酮类化合物，具有很好的抗氧化、抗帕金森病和抗癌活性。开发并验证了使用反相超快速液相色谱结合 C-18 反相柱评估大鼠血浆中非瑟酮的生物分析方法。槲皮素用作内标。流动相由比例为 30:70 v/v 的乙腈和正磷酸 (0.2% v/v) 组成。流速设置为 1 mL/min，在 362 nm 波长处检测到两种化合物的色谱图。采用蛋白质沉淀法从血浆样品中提取药物。漆黄素和槲皮素的保留时间分别为 8.3 分钟和 16.9 分钟。发现开发的方法在 25–125 ng/mL 范围内呈线性，回归系数 (r2) 为 0.9996。该方法根据 ICH Q2 (R1) 指南进行了验证。回收率在 95-105% 范围内，表明该方法是准确的。发现百分比相对标准偏差小于 2%，表明该方法是精确的。检测限 (LOD) 和定量限 (LOQ) 分别为 3.18 ng/mL 和 9.66 ng/mL。发现开发的方法是稳健的，因为随着流速和流动相组成的变化，响应没有任何显着变化。所得结果表明，所开发的方法已通过所有验证测试参数，可成功应用于大鼠血浆中非瑟酮的估算。该方法根据 ICH Q2 (R1) 指南进行了验证。回收率在 95-105% 范围内，表明该方法是准确的。发现百分比相对标准偏差小于 2%，表明该方法是精确的。检测限 (LOD) 和定量限 (LOQ) 分别为 3.18 ng/mL 和 9.66 ng/mL。发现开发的方法是稳健的，因为随着流速和流动相组成的变化，响应没有任何显着变化。所得结果表明，所开发的方法已通过所有验证测试参数，可成功应用于大鼠血浆中非瑟酮的估算。该方法根据 ICH Q2 (R1) 指南进行了验证。回收率在 95-105% 范围内，表明该方法是准确的。发现百分比相对标准偏差小于 2%，表明该方法是精确的。检测限 (LOD) 和定量限 (LOQ) 分别为 3.18 ng/mL 和 9.66 ng/mL。发现开发的方法是稳健的，因为随着流速和流动相组成的变化，响应没有任何显着变化。所得结果表明，所开发的方法已通过所有验证测试参数，可成功应用于大鼠血浆中非瑟酮的估算。这表明该方法是准确的。发现百分比相对标准偏差小于 2%，表明该方法是精确的。检测限 (LOD) 和定量限 (LOQ) 分别为 3.18 ng/mL 和 9.66 ng/mL。发现开发的方法是稳健的，因为随着流速和流动相组成的变化，响应没有任何显着变化。所得结果表明，所开发的方法已通过所有验证测试参数，可成功应用于大鼠血浆中非瑟酮的估算。这表明该方法是准确的。发现百分比相对标准偏差小于 2%，表明该方法是精确的。检测限 (LOD) 和定量限 (LOQ) 分别为 3.18 ng/mL 和 9.66 ng/mL。发现开发的方法是稳健的，因为随着流速和流动相组成的变化，响应没有任何显着变化。所得结果表明，所开发的方法已通过所有验证测试参数，可成功应用于大鼠血浆中非瑟酮的估算。发现开发的方法是稳健的，因为随着流速和流动相组成的变化，响应没有任何显着变化。所得结果表明，所开发的方法已通过所有验证测试参数，可成功应用于大鼠血浆中非瑟酮的估算。发现开发的方法是稳健的，因为随着流速和流动相组成的变化，响应没有任何显着变化。所得结果表明，所开发的方法已通过所有验证测试参数，可成功应用于大鼠血浆中非瑟酮的估算。