The Wnt/β-catenin pathway participates in many important physiological events such as cell proliferation and differentiation in the male reproductive system. We found that Kinesin-2 motor KIF3A is highly expressed during spermatogenesis in Eriocheir sinensis; it may potentially promote the intracellular transport of cargoes in this process. However, only a few studies have focused on the relationship between KIF3A and the Wnt/β-catenin pathway in the male reproductive system of decapod crustaceans. In this study, we cloned and characterized the CDS of β-catenin in E. sinensis for the first time. Fluorescence in situ hybridization and immunofluorescence results showed the colocalization of Es-KIF3A and Es-β-catenin at the mRNA and the protein level respectively. To further explore the regulatory function of Es-KIF3A to the Wnt/β-catenin pathway, the es-kif3a was knocked down by double-stranded RNA (dsRNA) in vivo and in primary cultured cells in testes of E. sinensis. Results showed that the expression of es-β-catenin and es-dvl were decreased in the es-kif3a knockdown group. The protein expression level of Es-β-catenin was also reduced and the location of Es-β-catenin was changed from nucleus to cytoplasm in the late stage of spermatogenesis when es-kif3a was knocked down. Besides, the co-IP result demonstrated that Es-KIF3A could bind with Es-β-catenin. In summary, this study indicates that Es-KIF3A can positively regulate the Wnt/β-catenin pathway during spermatogenesis and Es-KIF3A can bind with Es-β-catenin to facilitate the nuclear translocation of Es-β-catenin.

中文翻译：

---

KIF3A 通过在中华绒螯蟹精子发生过程中转运 β-catenin 来调节 Wnt/β-catenin 通路

Wnt/β-catenin 通路参与许多重要的生理事件，如男性生殖系统的细胞增殖和分化。我们发现Kinesin-2 motor KIF3A在中华绒螯蟹精子发生过程中高表达；在这个过程中，它可能潜在地促进货物的细胞内运输。然而，只有少数研究关注于十足目甲壳类动物雄性生殖系统中 KIF3A 与 Wnt/β-catenin 通路之间的关系。在本研究中，我们首次克隆并表征了中华绒螯蟹中 β-catenin 的 CDS。荧光原位杂交和免疫荧光结果显示 Es-KIF3A 和 Es-β-catenin 分别在 mRNA 和蛋白质水平上共定位。为了进一步探索 Es-KIF3A 对 Wnt/β-catenin 通路的调控功能，es-kif3a 在体内和原代培养的 E. sinensis 睾丸细胞中被双链 RNA (dsRNA) 敲低。结果表明，es-kif3a敲低组es-β-catenin和es-dvl的表达降低。Es-β-catenin的蛋白表达水平也降低，在精子发生后期，es-kif3a被敲低，Es-β-catenin的位置从细胞核变为细胞质。此外，co-IP 结果表明 Es-KIF3A 可以与 Es-β-catenin 结合。总之，本研究表明 Es-KIF3A 在精子发生过程中可以正向调节 Wnt/β-catenin 通路，并且 Es-KIF3A 可以与 Es-β-catenin 结合以促进 Es-β-catenin 的核转位。结果表明，es-kif3a敲低组es-β-catenin和es-dvl的表达降低。Es-β-catenin的蛋白表达水平也降低，在精子发生后期，es-kif3a被敲低，Es-β-catenin的位置从细胞核变为细胞质。此外，co-IP 结果表明 Es-KIF3A 可以与 Es-β-catenin 结合。总之，本研究表明 Es-KIF3A 在精子发生过程中可以正向调节 Wnt/β-catenin 通路，并且 Es-KIF3A 可以与 Es-β-catenin 结合以促进 Es-β-catenin 的核转位。结果表明，es-kif3a敲低组es-β-catenin和es-dvl的表达降低。Es-β-catenin的蛋白表达水平也降低，在精子发生后期，es-kif3a被敲低，Es-β-catenin的位置从细胞核变为细胞质。此外，co-IP 结果表明 Es-KIF3A 可以与 Es-β-catenin 结合。总之，本研究表明 Es-KIF3A 在精子发生过程中可以正向调节 Wnt/β-catenin 通路，并且 Es-KIF3A 可以与 Es-β-catenin 结合以促进 Es-β-catenin 的核转位。Es-β-catenin的蛋白表达水平也降低，在精子发生后期，es-kif3a被敲低，Es-β-catenin的位置从细胞核变为细胞质。此外，co-IP 结果表明 Es-KIF3A 可以与 Es-β-catenin 结合。总之，本研究表明 Es-KIF3A 在精子发生过程中可以正向调节 Wnt/β-catenin 通路，并且 Es-KIF3A 可以与 Es-β-catenin 结合以促进 Es-β-catenin 的核转位。Es-β-catenin的蛋白表达水平也降低，在精子发生后期，es-kif3a被敲低，Es-β-catenin的位置从细胞核变为细胞质。此外，co-IP 结果表明 Es-KIF3A 可以与 Es-β-catenin 结合。总之，本研究表明 Es-KIF3A 在精子发生过程中可以正向调节 Wnt/β-catenin 通路，并且 Es-KIF3A 可以与 Es-β-catenin 结合以促进 Es-β-catenin 的核转位。