Methyl 3,4,5-trimethoxycinnamate (MTC) is a bioactive natural phenylpropanoid. We evaluated anti-inflammatory effects of synthetic MTC in RAW264.7 macrophages and RAW264.7-3T3-L1 adipocytes co-culture. Levels of cytokines and chemokines, as well as NO and PGE2 in cell supernatants were analysed using ELISAs, Griess assay and enzyme immunoassays, respectively. In-cell cytoblot was used to assess levels of proteins; while DNA binding and reporter gene assays were used to measure transcription factor DNA binding and transcriptional activities, respectively. Glucose uptake in adipocytes was evaluated with 2-deoxy-2-[(7-nitro-2, 1, 3-benzoxadiazol-4-yl) amino]-D-glucose uptake. MTC (5-20 µM) suppressed LPS + IFNγ-induced release of TNFα, IL-6 and IL-1β, as well as NO/iNOS and PGE2/COX-2 levels in RAW264.7 cells. Furthermore, there was a reduction in phospho-IκB and phospho-p65 proteins, accompanied by a reduction in total IκB in RAW264.7 cells. Further studies showed that MTC also produced a reduction in NF-κB DNA binding and luciferase activity. Treatment of RAW264.7 cells with MTC (5-20 µM) resulted in enhanced DNA binding of Nrf2 and an increase in ARE-luciferase activity. In a macrophage-adipocyte co-culture, the compound reduced the release of TNFα, IL-6, IL-1β, MCP-1 and RANTES, while enhancing glucose uptake and activation of AMPKα. Our results suggest that MTC produced anti-inflammatory and antioxidant activities in macrophages. MTC also prevented inflammation in macrophage-adipocyte co-culture. The effect of MTC on glucose uptake in adipocytes is proposed to be linked to activation of AMPK.

中文翻译：

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3,4,5-三甲氧基肉桂酸甲酯抑制 RAW264.7 巨噬细胞的炎症并阻断巨噬细胞-脂肪细胞的相互作用。

3,4,5-三甲氧基肉桂酸甲酯 (MTC) 是一种具有生物活性的天然苯丙烷。我们评估了合成 MTC 在 RAW264.7 巨噬细胞和 RAW264.7-3T3-L1 脂肪细胞共培养中的抗炎作用。分别使用 ELISA、Griess 测定和酶免疫测定分析细胞上清液中细胞因子和趋化因子以及 NO 和 PGE2 的水平。细胞内细胞印迹用于评估蛋白质水平；而 DNA 结合和报告基因检测分别用于测量转录因子 DNA 结合和转录活性。用 2-deoxy-2-[(7-nitro-2, 1, 3-benzoxadiazol-4-yl) 氨基]-D-葡萄糖摄取来评估脂肪细胞中的葡萄糖摄取。MTC (5-20 µM) 抑制 LPS + IFNγ 诱导的 TNFα、IL-6 和 IL-1β 释放，以及 RAW264.7 细胞中 NO/iNOS 和 PGE2/COX-2 水平。此外，磷酸-IκB 和磷酸-p65 蛋白减少，同时 RAW264.7 细胞中总 IκB 减少。进一步的研究表明，MTC 还降低了 NF-κB DNA 结合和荧光素酶活性。用 MTC (5-20 µM) 处理 RAW264.7 细胞导致 Nrf2 的 DNA 结合增强和 ARE-荧光素酶活性增加。在巨噬细胞-脂肪细胞共培养中，该化合物减少了 TNFα、IL-6、IL-1β、MCP-1 和 RANTES 的释放，同时增强了葡萄糖摄取和 AMPKα 的激活。我们的结果表明 MTC 在巨噬细胞中产生抗炎和抗氧化活性。MTC 还可以防止巨噬细胞-脂肪细胞共培养中的炎症。MTC 对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响被认为与 AMPK 的激活有关。伴随着 RAW264.7 细胞中总 IκB 的减少。进一步的研究表明，MTC 还降低了 NF-κB DNA 结合和荧光素酶活性。用 MTC (5-20 µM) 处理 RAW264.7 细胞导致 Nrf2 的 DNA 结合增强和 ARE-荧光素酶活性增加。在巨噬细胞-脂肪细胞共培养中，该化合物减少了 TNFα、IL-6、IL-1β、MCP-1 和 RANTES 的释放，同时增强了葡萄糖摄取和 AMPKα 的激活。我们的结果表明 MTC 在巨噬细胞中产生抗炎和抗氧化活性。MTC 还可以防止巨噬细胞-脂肪细胞共培养中的炎症。MTC 对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响被认为与 AMPK 的激活有关。伴随着 RAW264.7 细胞中总 IκB 的减少。进一步的研究表明，MTC 还降低了 NF-κB DNA 结合和荧光素酶活性。用 MTC (5-20 µM) 处理 RAW264.7 细胞导致 Nrf2 的 DNA 结合增强和 ARE-荧光素酶活性增加。在巨噬细胞-脂肪细胞共培养中，该化合物减少了 TNFα、IL-6、IL-1β、MCP-1 和 RANTES 的释放，同时增强了葡萄糖摄取和 AMPKα 的激活。我们的结果表明 MTC 在巨噬细胞中产生抗炎和抗氧化活性。MTC 还可以防止巨噬细胞-脂肪细胞共培养中的炎症。MTC 对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响被认为与 AMPK 的激活有关。用 MTC (5-20 µM) 处理 RAW264.7 细胞导致 Nrf2 的 DNA 结合增强和 ARE-荧光素酶活性增加。在巨噬细胞-脂肪细胞共培养中，该化合物减少了 TNFα、IL-6、IL-1β、MCP-1 和 RANTES 的释放，同时增强了葡萄糖摄取和 AMPKα 的激活。我们的结果表明 MTC 在巨噬细胞中产生抗炎和抗氧化活性。MTC 还可以防止巨噬细胞-脂肪细胞共培养中的炎症。MTC 对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响被认为与 AMPK 的激活有关。用 MTC (5-20 µM) 处理 RAW264.7 细胞导致 Nrf2 的 DNA 结合增强和 ARE-荧光素酶活性增加。在巨噬细胞-脂肪细胞共培养中，该化合物减少了 TNFα、IL-6、IL-1β、MCP-1 和 RANTES 的释放，同时增强了葡萄糖摄取和 AMPKα 的激活。我们的结果表明 MTC 在巨噬细胞中产生抗炎和抗氧化活性。MTC 还可以防止巨噬细胞-脂肪细胞共培养中的炎症。MTC 对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响被认为与 AMPK 的激活有关。我们的结果表明 MTC 在巨噬细胞中产生抗炎和抗氧化活性。MTC 还可以防止巨噬细胞-脂肪细胞共培养中的炎症。MTC 对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响被认为与 AMPK 的激活有关。我们的结果表明 MTC 在巨噬细胞中产生抗炎和抗氧化活性。MTC 还可以防止巨噬细胞-脂肪细胞共培养中的炎症。MTC 对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响被认为与 AMPK 的激活有关。