Apelin receptor (APJ) and bradykinin B2 receptor (B2R) play an important role in many physiological processes and share multiple similar characteristics in distribution and functions in the cardiovascular system. We first identified the endogenous expression of APJ and B2R in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and their co-localization on human embryonic kidney (HEK) 293 cells membrane. A suite of bioluminescence and fluorescence resonance energy transfer (BRET and FRET), proximity ligation assay (PLA), and co-immunoprecipitation (Co-IP) was exploited to demonstrate formation of functional APJ and B2R heterodimer in HUVECs and transfected cells. Stimulation with apelin-13 and bradykinin (BK) increased the phosphorylation of the endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in HUVECs, which could be inhibited by the silencing of APJ or B2R, indicating the APJ-B2R dimer is critical for eNOS phosphorylation in HUVECs. Furthermore, the increase of NOS and extracellular signal regulated kinases1/2 (ERK1/2) phosphorylation mediated by APJ/B2R dimer can be inhibited by U0126 and U73122, respectively, suggesting that the heterodimer might activate the PLC/ERK1/2/eNOS signaling pathway, and finally leading to a significant increase in cell proliferation. Thus, we uncovered for the first time the existence of APJ-B2R heterodimer and provided a promising new target in cardiovascular therapeutics.

中文翻译：

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APJ 和 B2R 异二聚化在通过 ERK1/2-eNOS 信号通路促进细胞增殖中的作用。

Apelin 受体 (APJ) 和缓激肽 B2 受体 (B2R) 在许多生理过程中发挥重要作用，在心血管系统中的分布和功能方面具有多个相似的特征。我们首先确定了 APJ 和 B2R 在人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 中的内源性表达及其在人胚胎肾 (HEK) 293 细胞膜上的共定位。利用一套生物发光和荧光共振能量转移（BRET 和 FRET）、邻近连接测定（PLA）和免疫共沉淀（Co-IP）来证明 HUVEC 和转染细胞中功能性 APJ 和 B2R 异二聚体的形成。apelin-13 和缓激肽 (BK) 的刺激增加了 HUVEC 中内皮一氧化氮合酶 (eNOS) 的磷酸化，这可以通过 APJ 或 B2R 的沉默来抑制，表明 APJ-B2R 二聚体对于 HUVEC 中的 eNOS 磷酸化至关重要。此外，由APJ/B2R二聚体介导的NOS和细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）磷酸化的增加可以分别被U0126和U73122抑制，表明异二聚体可能激活PLC/ERK1/2/eNOS信号传导途径，最终导致细胞增殖的显着增加。因此，我们首次发现了 APJ-B2R 异二聚体的存在，并为心血管治疗提供了一个有希望的新靶点。表明异二聚体可能激活 PLC/ERK1/2/eNOS 信号通路，最终导致细胞增殖的显着增加。因此，我们首次发现了 APJ-B2R 异二聚体的存在，并为心血管治疗提供了一个有希望的新靶点。表明异二聚体可能激活 PLC/ERK1/2/eNOS 信号通路，最终导致细胞增殖的显着增加。因此，我们首次发现了 APJ-B2R 异二聚体的存在，并为心血管治疗提供了一个有希望的新靶点。