ABSTRACT Embryonic stem cells (ESCs) derived from outbred mice which share several genetic characteristics similar to humans have been requested for developing stem cell-based bioengineering techniques directly applicable to humans. Here, we report the generation of ESCs derived from the inner cell mass of blastocysts retrieved from 9-week-old female outbred ICR mice mated with 9-week-old male outbred ICR mice (ICRESCs). Similar to those from 129/Ola mouse blastocysts (E14ESCs), the established ICRESCs showed inherent characteristics of ESCs except for partial and weak protein expression and activity of alkaline phosphatase. Moreover, ICRESCs were not originated from embryonic germ cells or pluripotent cells that may co-exist in outbred ICR strain-derived mouse embryonic fibroblasts (ICRMEFs) used for deriving colonies from inner cell mass of outbred ICR mouse blastocysts. Furthermore, instead of outbred ICRMEFs, hybrid B6CBAF1MEFs as feeder cells could sufficiently support in vitro maintenance of ICRESC self-renewal. Additionally, ICRESC-specific characteristics (self-renewal, pluripotency, and chromosomal normality) were observed in ICRESCs cultured for 40th subpassages (164 days) on B6CBAF1MEFs without any alterations. These results confirmed the successful establishment of ESCs derived from outbred ICR mice, and indicated that self-renewal and pluripotency of the established ICRESCs could be maintained on B6CBAF1MEFs in culture.

中文翻译：

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来自远交 ICR 小鼠囊胚内细胞团的胚胎干细胞的产生

摘要 胚胎干细胞 (ESCs) 源自远交小鼠，具有与人类相似的几个遗传特征，已被要求开发直接适用于人类的基于干细胞的生物工程技术。在这里，我们报告了从 9 周龄雌性远交 ICR 小鼠与 9 周龄雄性远交 ICR 小鼠 (ICRESC) 交配的囊胚内细胞团中产生的胚胎干细胞。与来自 129/Ola 小鼠囊胚（E14ESCs）的那些相似，建立的 ICRESCs 显示出 ESCs 的固有特征，除了部分和弱的蛋白质表达和碱性磷酸酶的活性。而且，ICRESC 并非源自胚胎生殖细胞或多能细胞，它们可能共存于远交 ICR 品系衍生的小鼠胚胎成纤维细胞 (ICRMEF) 中，用于从远交 ICR 小鼠囊胚的内细胞团中获得集落。此外，作为饲养细胞的杂交 B6CBAF1MEF 可以充分支持 ICRESC 自我更新的体外维持，而不是远交 ICRMEF。此外，在 B6CBAF1MEF 上培养第 40 次传代（164 天）的 ICRESC 中观察到 ICRESC 特异性特征（自我更新、多能性和染色体正常性），没有任何改变。这些结果证实了源自远交 ICR 小鼠的 ESC 的成功建立，并表明已建立的 ICRESC 的自我更新和多能性可以在培养的 B6CBAF1MEF 上保持。代替远交 ICRMEF，杂交 B6CBAF1MEF 作为饲养细胞可以充分支持 ICRESC 自我更新的体外维持。此外，在 B6CBAF1MEF 上培养第 40 次传代（164 天）的 ICRESCs 中观察到 ICRESC 特异性特征（自我更新、多能性和染色体正常性）而没有任何改变。这些结果证实了源自远交 ICR 小鼠的 ESC 的成功建立，并表明已建立的 ICRESC 的自我更新和多能性可以在培养的 B6CBAF1MEF 上保持。代替远交 ICRMEF，杂交 B6CBAF1MEF 作为饲养细胞可以充分支持 ICRESC 自我更新的体外维持。此外，在 B6CBAF1MEF 上培养第 40 次传代（164 天）的 ICRESCs 中观察到 ICRESC 特异性特征（自我更新、多能性和染色体正常性）而没有任何改变。这些结果证实了源自远交 ICR 小鼠的 ESC 的成功建立，并表明已建立的 ICRESC 的自我更新和多能性可以在培养的 B6CBAF1MEF 上保持。在 B6CBAF1MEF 上培养第 40 次传代（164 天）的 ICRESCs 中观察到无任何改变。这些结果证实了源自远交 ICR 小鼠的 ESC 的成功建立，并表明已建立的 ICRESC 的自我更新和多能性可以在培养的 B6CBAF1MEF 上保持。在 B6CBAF1MEF 上培养第 40 次传代（164 天）的 ICRESCs 中观察到无任何改变。这些结果证实了源自远交 ICR 小鼠的 ESC 的成功建立，并表明已建立的 ICRESC 的自我更新和多能性可以在培养的 B6CBAF1MEF 上保持。