This study aimed to investigate whether X inactivate-specific transcript (XIST) regulated the expression of tissue non-specific alkaline phosphatase (ALPL) through miR-9-5p to promote osteogenic differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells (hBMSCs). We elucidated the molecular regulation mechanisms of XIST underlying osteogenic differentiation of hBMSCs. In osteoporotic patients with hBMSCs, the expression of miR-9-5p was upregulated and the expression of XIST was downregulated. When hBMSCs were treated with osteogenic induction, the expression of XIST was increased and the expression of miR-9-5p was decreased. The osteogenic differentiation of hBMSCs was significantly decreased after knocking down XIST. Luciferase analysis revealed that XIST could directly bind to miR-9-5p and exert a negative regulatory effect on its expression. MiR-9-5p could bind directly to the 3'-UTR of ALPL and inhibit the expression of ALPL. Knockout of XIST reduced the expression of ALPL, while co-transfection of the miR-9-5p inhibitor could reverse the expression of the ALPL gene. In hBMSCs, overexpression of XIST upregulated the expression of ALPL, but the miR-9-5p mimic could reverse the expression of ALPL. Furthermore, silencing of ALPL could downregulate the expression of osteopontin(OPN) and osteocalcin(OCN) induced by miR-9-5p inhibitors. In conclusion, XIST regulated the expression of ALPL by targeting miR-9-5p. It could be used as a positive regulator of osteogenic differentiation of hBMSC.

中文翻译：

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长链非编码 RNA XIST 通过靶向 miR-9-5p 调节人骨髓间充质干细胞的成骨分化

本研究旨在探讨 X 灭活特异性转录物 (XIST) 是否通过 miR-9-5p 调节组织非特异性碱性磷酸酶 (ALPL) 的表达，以促进人骨髓间充质干细胞 (hBMSCs) 的成骨分化。我们阐明了 XIST 潜在的 hBMSCs 成骨分化的分子调控机制。在hBMSCs骨质疏松患者中，miR-9-5p表达上调，XIST表达下调。hBMSCs经成骨诱导处理后，XIST的表达增加，miR-9-5p的表达降低。敲低 XIST 后，hBMSCs 的成骨分化显着降低。荧光素酶分析表明，XIST 可以直接结合 miR-9-5p 并对其表达产生负调控作用。MiR-9-5p 可以直接结合 ALPL 的 3'-UTR 并抑制 ALPL 的表达。XIST 的敲除降低了 ALPL 的表达，而 miR-9-5p 抑制剂的共转染可以逆转 ALPL 基因的表达。在 hBMSC 中，XIST 的过表达上调了 ALPL 的表达，但 miR-9-5p 模拟物可以逆转 ALPL 的表达。此外，ALPL的沉默可以下调miR-9-5p抑制剂诱导的骨桥蛋白（OPN）和骨钙素（OCN）的表达。总之，XIST 通过靶向 miR-9-5p 调节 ALPL 的表达。它可以用作 hBMSC 成骨分化的正调节剂。-UTR of ALPL 并抑制 ALPL 的表达。XIST 的敲除降低了 ALPL 的表达，而 miR-9-5p 抑制剂的共转染可以逆转 ALPL 基因的表达。在 hBMSC 中，XIST 的过表达上调了 ALPL 的表达，但 miR-9-5p 模拟物可以逆转 ALPL 的表达。此外，ALPL的沉默可以下调miR-9-5p抑制剂诱导的骨桥蛋白（OPN）和骨钙素（OCN）的表达。总之，XIST 通过靶向 miR-9-5p 调节 ALPL 的表达。它可以用作 hBMSC 成骨分化的正调节剂。-UTR of ALPL 并抑制 ALPL 的表达。XIST 的敲除降低了 ALPL 的表达，而 miR-9-5p 抑制剂的共转染可以逆转 ALPL 基因的表达。在 hBMSC 中，XIST 的过表达上调了 ALPL 的表达，但 miR-9-5p 模拟物可以逆转 ALPL 的表达。此外，ALPL的沉默可以下调miR-9-5p抑制剂诱导的骨桥蛋白（OPN）和骨钙素（OCN）的表达。总之，XIST 通过靶向 miR-9-5p 调节 ALPL 的表达。它可以用作 hBMSC 成骨分化的正调节剂。但 miR-9-5p 模拟物可以逆转 ALPL 的表达。此外，ALPL的沉默可以下调miR-9-5p抑制剂诱导的骨桥蛋白（OPN）和骨钙素（OCN）的表达。总之，XIST 通过靶向 miR-9-5p 调节 ALPL 的表达。它可以用作 hBMSC 成骨分化的正调节剂。但 miR-9-5p 模拟物可以逆转 ALPL 的表达。此外，ALPL的沉默可以下调miR-9-5p抑制剂诱导的骨桥蛋白（OPN）和骨钙素（OCN）的表达。总之，XIST 通过靶向 miR-9-5p 调节 ALPL 的表达。它可以用作 hBMSC 成骨分化的正调节剂。