The RNA genome of citrus tristeza virus (CTV), one of the most damaging viral pathogens of citrus, contains 12 open reading frames resulting in production of at least 19 proteins. Previous studies on the intraviral interactome of CTV revealed self-interaction of the viral RNA-dependent RNA polymerase, the major coat protein (CP), p20, p23, and p33 proteins, while heterologous interactions between the CTV proteins have not been characterized. In this work, we examined interactions between the p33 protein, a nonconserved protein of CTV, which performs multiple functions in the virus infection cycle and is needed for virus ability to infect the extended host range, with other CTV proteins shown to mediate virus interactions with its plant hosts. Using yeast two-hybrid, bimolecular fluorescence complementation, and coimmunoprecipitation assays, we demonstrated that p33 interacts with three viral proteins, i.e., CP, p20, and p23, in vivo and in planta. Coexpression of p33, which is an integral membrane protein, resulted in a shift in the localization of the p20 and p23 proteins toward the subcellular crude-membrane fraction. Upon CTV infection, the four proteins colocalized in the CTV replication factories. In addition, three of them, CP, p20, and p23, were found in the p33-formed membranous structures. Using bioinformatic analyses and mutagenesis, we found that the N-terminus of p33 is involved in the interactions with all three protein partners. A potential role of these interactions in virus ability to infect the extended host range is discussed.

中文翻译：

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柑橘Tristeza病毒的非保守p33蛋白与多个病毒伴侣相互作用。

柑橘Tristeza病毒（CTV）的RNA基因组是柑橘最具破坏性的病毒病原体之一，包含12个开放阅读框，可产生至少19种蛋白质。先前对CTV病毒内相互作用组的研究表明，病毒RNA依赖性RNA聚合酶，主要外壳蛋白（CP），p20，p23和p33蛋白具有自相互作用，而CTV蛋白之间的异源相互作用尚未被表征。在这项工作中，我们研究了p33蛋白（一种不保守的CTV蛋白）之间的相互作用，该蛋白在病毒感染周期中起着多种功能，是病毒感染扩展宿主范围的能力所必需的，它与其他CTV蛋白可以介导病毒相互作用。它的植物宿主。使用酵母双杂交，双分子荧光互补和共免疫沉淀测定，我们证明了p33在体内和植物中与三种病毒蛋白，即CP，p20和p23相互作用。共表达p33是一种完整的膜蛋白，导致p20和p23蛋白的定位向亚细胞粗膜部分转移。在CTV感染后，这四种蛋白质在CTV复制工厂共定位。此外，在p33形成的膜状结构中发现了CP，p20和p23这三个。使用生物信息学分析和诱变，我们发现p33的N末端参与了与所有三个蛋白质伴侣的相互作用。讨论了这些相互作用在病毒感染扩展宿主范围的能力中的潜在作用。它是不可或缺的膜蛋白，导致p20和p23蛋白的定位向亚细胞粗膜部分转移。在CTV感染后，这四种蛋白质在CTV复制工厂共定位。此外，在p33形成的膜状结构中发现了CP，p20和p23这三个。使用生物信息学分析和诱变，我们发现p33的N末端参与了与所有三个蛋白质伴侣的相互作用。讨论了这些相互作用在病毒感染扩展宿主范围的能力中的潜在作用。它是不可或缺的膜蛋白，导致p20和p23蛋白的定位向亚细胞粗膜部分转移。在CTV感染后，这四种蛋白质在CTV复制工厂共定位。此外，在p33形成的膜状结构中发现了CP，p20和p23这三个。使用生物信息学分析和诱变，我们发现p33的N末端参与了与所有三个蛋白质伴侣的相互作用。讨论了这些相互作用在病毒感染扩展宿主范围的能力中的潜在作用。在p33形成的膜结构中被发现。使用生物信息学分析和诱变，我们发现p33的N末端参与了与所有三个蛋白质伴侣的相互作用。讨论了这些相互作用在病毒感染扩展宿主范围的能力中的潜在作用。在p33形成的膜结构中被发现。使用生物信息学分析和诱变，我们发现p33的N末端参与了与所有三个蛋白质伴侣的相互作用。讨论了这些相互作用在病毒感染扩展宿主范围的能力中的潜在作用。