Transforming growth factor β2 (TGF-β2)/Smad signaling is widely accepted as a key inducer of proliferation and epithelial-mesenchymal transition (EMT) of human lens epithelial cells (LECs), contributing to the development of posterior capsule opacification (PCO). Increasing evidence shows that microRNAs (miRNAs) play important roles in PCO pathogenesis. Herein, we aimed to explore the role and molecular mechanism of let-7a-5p on TGF-β2-induced proliferation and EMT in LECs. qRT-PCR was performed to detect the expression of let-7a-5p and Smad2 mRNA. Western blot was used to determine the Smad2 level and the induction of EMT. The targeted correlation between let-7a-5p and Smad2 was confirmed using dual-luciferase reporter and RNA immunoprecipitation assays. CCK-8 assay was employed to determine cell proliferation, and transwell assays were performed to assess cell migration and invasion. We found that TGF-β2 induced EMT of LECs, and TGF-β2 upregulated Smad2 expression and reduced let-7a-5p expression in LECs. Smad2 was a direct target of let-7a-5p. Moreover, let-7a-5p upregulation repressed proliferation, migration, invasion and EMT in TGF-β2-induced LECs. But, Smad2 expression restoration abrogated the inhibitory effect of let-7a-5p upregulation. In conclusion, our data indicated that let-7a-5p upregulation repressed TGF-β2-induced proliferation, migration, invasion and EMT at least partly by targeting Smad2 in LECs, highlighting that let-7a-5p might act as a promising therapeutic target to intervene to the progression of PCO.

中文翻译：

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Let-7a-5p 通过靶向 TGF-β2 诱导的人晶状体上皮细胞中的 Smad2 抑制增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化

转化生长因子 β2 (TGF-β2)/Smad 信号转导被广泛认为是人晶状体上皮细胞 (LEC) 增殖和上皮间质转化 (EMT) 的关键诱导剂，有助于后囊混浊 (PCO) 的发展。越来越多的证据表明，microRNA (miRNA) 在 PCO 发病机制中起着重要作用。在此，我们旨在探讨 let-7a-5p 在 TGF-β2 诱导的 LEC 增殖和 EMT 中的作用和分子机制。进行qRT-PCR以检测let-7a-5p和Smad2 mRNA的表达。蛋白质印迹用于确定 Smad2 水平和 EMT 的诱导。使用双荧光素酶报告基因和 RNA 免疫沉淀分析证实了 let-7a-5p 和 Smad2 之间的靶向相关性。采用 CCK-8 法测定细胞增殖，和 transwell 测定用于评估细胞迁移和侵袭。我们发现 TGF-β2 诱导 LECs 的 EMT，并且 TGF-β2 上调 Smad2 表达并降低 LECs 中的 let-7a-5p 表达。Smad2 是 let-7a-5p 的直接目标。此外，let-7a-5p 上调抑制了 TGF-β2 诱导的 LEC 的增殖、迁移、侵袭和 EMT。但是，Smad2 表达恢复废除了 let-7a-5p 上调的抑制作用。总之，我们的数据表明，let-7a-5p 上调至少部分是通过靶向 LEC 中的 Smad2 来抑制 TGF-β2 诱导的增殖、迁移、侵袭和 EMT，突出显示 let-7a-5p 可能作为一个有希望的治疗靶点干预 PCO 的进展。和 TGF-β2 上调 Smad2 表达并降低 LEC 中的 let-7a-5p 表达。Smad2 是 let-7a-5p 的直接目标。此外，let-7a-5p 上调抑制了 TGF-β2 诱导的 LEC 的增殖、迁移、侵袭和 EMT。但是，Smad2 表达恢复废除了 let-7a-5p 上调的抑制作用。总之，我们的数据表明，let-7a-5p 上调至少部分是通过靶向 LEC 中的 Smad2 来抑制 TGF-β2 诱导的增殖、迁移、侵袭和 EMT，突出显示 let-7a-5p 可能作为一个有希望的治疗靶点干预 PCO 的进展。和 TGF-β2 上调 Smad2 表达并降低 LEC 中的 let-7a-5p 表达。Smad2 是 let-7a-5p 的直接目标。此外，let-7a-5p 上调抑制了 TGF-β2 诱导的 LEC 的增殖、迁移、侵袭和 EMT。但是，Smad2 表达恢复废除了 let-7a-5p 上调的抑制作用。总之，我们的数据表明，let-7a-5p 上调至少部分是通过靶向 LEC 中的 Smad2 来抑制 TGF-β2 诱导的增殖、迁移、侵袭和 EMT，突出显示 let-7a-5p 可能作为一个有希望的治疗靶点干预 PCO 的进展。Smad2 表达恢复废除了 let-7a-5p 上调的抑制作用。总之，我们的数据表明，let-7a-5p 上调至少部分是通过靶向 LEC 中的 Smad2 来抑制 TGF-β2 诱导的增殖、迁移、侵袭和 EMT，突出显示 let-7a-5p 可能作为一个有希望的治疗靶点干预 PCO 的进展。Smad2 表达恢复废除了 let-7a-5p 上调的抑制作用。总之，我们的数据表明，let-7a-5p 上调至少部分是通过靶向 LEC 中的 Smad2 来抑制 TGF-β2 诱导的增殖、迁移、侵袭和 EMT，突出显示 let-7a-5p 可能作为一个有希望的治疗靶点干预 PCO 的进展。