Surfactant Protein D (SP-D) is a collectin protein that participates in the innate immune defense of the lungs. SP-D mediates the clearance of invading microorganisms by opsonization, aggregation or direct killing, which are lately removed by macrophages. SP-D is found as a mixture of trimers, hexamers, dodecamers and higher order oligomers, "fuzzy balls". However, it is unknown whether there are differences between these oligomeric forms in functions, activity or potency. In the present work, we have obtained fractions enriched in trimers, hexamers and fuzzy balls of full-length recombinant human (rh) SP-D by size exclusion chromatography, in a sufficient amount to perform functional assays. We have evaluated the differences in protein lectin-dependent activity relative to aggregation and binding to E. coli, one of the ligands of SP-D in vivo. Fuzzy balls are the most active oligomeric form in terms of binding and aggregation of bacteria, achieving 2-fold binding higher than hexamers and 50% bacteria aggregation at very short times. Hexamers, recently described as a defined oligomeric form of the protein, have never been isolated or tested in terms of protein activity. rhSP-D hexamers efficiently bind and aggregate bacteria, achieving 50-60% aggregation at final time point and high protein concentrations. Nevertheless, trimers are not able to aggregate bacteria, although they bind to them. Therefore, SP-D potency, in functions that relay on the C-lectin activity of the protein, is proportional to the oligomeric state of the protein.

中文翻译：

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不同寡聚形式的人表面活性蛋白 SP-D 的功能表征。

表面活性剂蛋白 D (SP-D) 是一种集合素蛋白，参与肺的先天免疫防御。SP-D 通过调理作用、聚集或直接杀死来介导入侵微生物的清除，这些微生物最近被巨噬细胞清除。SP-D 是三聚体、六聚体、十二聚体和高阶低聚物“模糊球”的混合物。然而，尚不清楚这些寡聚形式在功能、活性或效力方面是否存在差异。在目前的工作中，我们通过尺寸排阻色谱获得了富含三聚体、六聚体和全长重组人 (rh) SP-D 模糊球的级分，其数量足以进行功能测定。我们评估了蛋白质凝集素依赖性活性相对于聚集和与大肠杆菌的结合的差异，体内 SP-D 的配体之一。就细菌的结合和聚集而言，模糊球是最活跃的寡聚形式，在很短的时间内实现了比六聚体高 2 倍的结合和 50% 的细菌聚集。六聚体，最近被描述为蛋白质的定义寡聚形式，从未在蛋白质活性方面被分离或测试。rhSP-D 六聚体可有效结合和聚集细菌，在最终时间点和高蛋白质浓度下实现 50-60% 的聚集。然而，三聚体不能聚集细菌，尽管它们与它们结合。因此，在依赖蛋白质 C-凝集素活性的功能中，SP-D 效力与蛋白质的寡聚状态成正比。在很短的时间内实现比六聚体高 2 倍的结合和 50% 的细菌聚集。六聚体，最近被描述为蛋白质的定义寡聚形式，从未在蛋白质活性方面被分离或测试。rhSP-D 六聚体可有效结合和聚集细菌，在最终时间点和高蛋白质浓度下实现 50-60% 的聚集。然而，三聚体不能聚集细菌，尽管它们与它们结合。因此，在依赖蛋白质 C-凝集素活性的功能中，SP-D 效力与蛋白质的寡聚状态成正比。在很短的时间内实现比六聚体高 2 倍的结合和 50% 的细菌聚集。六聚体，最近被描述为蛋白质的定义寡聚形式，从未在蛋白质活性方面被分离或测试。rhSP-D 六聚体可有效结合和聚集细菌，在最终时间点和高蛋白质浓度下实现 50-60% 的聚集。然而，三聚体不能聚集细菌，尽管它们与它们结合。因此，在依赖蛋白质 C-凝集素活性的功能中，SP-D 效力与蛋白质的寡聚状态成正比。rhSP-D 六聚体可有效结合和聚集细菌，在最终时间点和高蛋白质浓度下实现 50-60% 的聚集。然而，三聚体不能聚集细菌，尽管它们与它们结合。因此，在依赖蛋白质 C-凝集素活性的功能中，SP-D 效力与蛋白质的寡聚状态成正比。rhSP-D 六聚体可有效结合和聚集细菌，在最终时间点和高蛋白质浓度下实现 50-60% 的聚集。然而，三聚体不能聚集细菌，尽管它们与它们结合。因此，在依赖蛋白质 C-凝集素活性的功能中，SP-D 效力与蛋白质的寡聚状态成正比。