Parenterally administered snake antivenom immunoglobulins are the only specific treatment for envenoming by snakebites. Endotoxin removal is a necessary part of good manufacturing practice for antivenom products to avoid life-threatening consequences associated with injecting endotoxin-contaminated product. Optimization of pH is an essential factor in endotoxin purification. This study aimed to compare ultrafiltration, ion-exchange chromatography and affinity resin-based chromatography techniques at different pH values to select the depyrogenation method with the highest endotoxin removal efficiency and optimum protein/product recovery. Affinity resin-based chromatography achieved 91.2% protein recovery at acidic pH without detectable endotoxins, while ion-exchange chromatography achieved 74.42% protein recovery at pH 7.5. In contrast, ultrafiltration achieved the lowest protein recovery compared to other chromatography techniques. In addition, ultrafiltration was ineffective in removing serum albumin (~ 42–57 kDa) and low molecular weight (MW) Fc fragments (~ 24–31 kDa). In conclusion, affinity resin-based chromatography has proven to be the most effective endotoxin removal method, while ultrafiltration may not be appropriate for the removal of bacterial LPS from antivenom sera. Moreover, this study demonstrated the existence of an optimum pH for each chromatographic method for the purpose of producing sterile and endotoxin-free snake antivenoms.

中文翻译：

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从蛇抗蛇毒血清中去除内毒素的有效方法

肠胃外给药的抗蛇毒血清免疫球蛋白是治疗蛇咬伤毒液的唯一特异性治疗方法。去除内毒素是抗蛇毒血清产品良好生产规范的必要组成部分，以避免因注射内毒素污染产品而导致危及生命的后果。pH 的优化是内毒素纯化的一个重要因素。本研究旨在比较不同 pH 值下的超滤、离子交换色谱和基于亲和树脂的色谱技术，以选择具有最高内毒素去除效率和最佳蛋白质/产物回收率的去热原方法。基于亲和树脂的色谱在酸性 pH 下实现了 91.2% 的蛋白质回收率，而没有检测到内毒素，而离子交换色谱在 pH 7.5 下实现了 74.42% 的蛋白质回收率。相比之下，与其他色谱技术相比，超滤实现了最低的蛋白质回收率。此外，超滤无法有效去除血清白蛋白 (~ 42–57 kDa) 和低分子量 (MW) Fc 片段 (~ 24–31 kDa)。总之，基于亲和树脂的色谱已被证明是最有效的内毒素去除方法，而超滤可能不适合从抗蛇毒血清中去除细菌 LPS。此外，这项研究表明，为了生产无菌和无内毒素的蛇抗蛇毒血清，每种色谱方法都存在最佳 pH 值。总之，基于亲和树脂的色谱已被证明是最有效的内毒素去除方法，而超滤可能不适合从抗蛇毒血清中去除细菌 LPS。此外，这项研究表明，为了生产无菌和无内毒素的蛇抗蛇毒血清，每种色谱方法都存在最佳 pH 值。总之，基于亲和树脂的层析已被证明是最有效的内毒素去除方法，而超滤可能不适合从抗蛇毒血清中去除细菌 LPS。此外，这项研究表明，为了生产无菌和无内毒素的蛇抗蛇毒血清，每种色谱方法都存在最佳 pH 值。