Salmonella can enter on the viable but non-culturable state (VBNC), characterized by the loss of ability to grow in routine culture media hindering detection by conventional methods and underestimation of the pathogen. Despite advances in research done so far, studies comparing conditions that lead Salmonella into the VBNC state are scarce. The main objective of this study was to evaluate different stresses to induce Salmonella to the VNBC state. Osmotic (1.2 M NaCl), acid (peracetic acid, 5.66 mg/mL) and oxidative (hydrogen peroxide, 1.20 mg/mL) stress were used at 4 °C to induce Salmonella enterica serovars Enteritidis and Typhimurium to the VBNC state. The culturability loss was monitored in the brain heart infusion (BHI) broth and agar, and the viability was determined by fluorescence microscopy, using the Live/Dead® kit, and by flow cytometry. Besides, the morphological characterization by atomic force microscopy (AFM) was performed. Storage in 1.2 M NaCl at 4 °C induced the VBNC state in Salmonella cells for periods longer than 121 days, and the percentage of viable cells has reached above 80.9%. More aggressive stress conditions promoted by peracetic acid and hydrogen peroxide induced the VBNC state in periods of, at most 0.14 day, and resulted in percentages of 8.5% to 45.5% viable cells, respectively. The counts of viable cells in the flow cytometer corroborate the results obtained by microscopic counts. The VBNC cells obtained in 1.2 M NaCl at 4 °C showed morphological changes, reducing the size and changing the morphology from bacillary to coccoid. No morphological change was observed on the cells stressed by acid or oxidant compounds.

中文翻译：

---

在沙门氏菌中诱导存活但不可培养状态的压力条件的比较

沙门氏菌可以进入有活力但不可培养的状态 (VBNC)，其特征是丧失在常规培养基中生长的能力，阻碍了常规方法的检测和对病原体的低估。尽管迄今为止的研究取得了进展，但比较导致沙门氏菌进入 VBNC 状态的条件的研究很少。本研究的主要目的是评估不同的压力，以诱导沙门氏菌进入 VNBC 状态。在 4°C 下使用渗透（1.2 M NaCl）、酸（过氧乙酸，5.66 mg/mL）和氧化（过氧化氢，1.20 mg/mL）应激诱导肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌进入 VBNC 状态。在脑心浸液 (BHI) 肉汤和琼脂中监测可培养性损失，并通过荧光显微镜、使用 Live/Dead® 试剂盒和流式细胞术测定存活率。此外，通过原子力显微镜（AFM）进行形态学表征。在 4°C 的 1.2 M NaCl 中储存可诱导沙门氏菌细胞中的 VBNC 状态超过 121 天，并且活细胞的百分比已达到 80.9% 以上。过乙酸和过氧化氢促进的更具侵略性的压力条件在最多 0.14 天的时间内诱导了 VBNC 状态，并分别导致 8.5% 至 45.5% 的活细胞百分比。流式细胞仪中活细胞的计数证实了显微镜计数获得的结果。在 4°C 下在 1.2 M NaCl 中获得的 VBNC 细胞显示出形态变化，减小了尺寸并将形态从杆菌变为球状。在受到酸或氧化剂化合物胁迫的细胞上未观察到形态变化。通过原子力显微镜（AFM）进行形态学表征。在 4°C 的 1.2 M NaCl 中储存可诱导沙门氏菌细胞中的 VBNC 状态超过 121 天，并且活细胞的百分比已达到 80.9% 以上。过乙酸和过氧化氢促进的更具侵略性的压力条件在最多 0.14 天的时间内诱导了 VBNC 状态，并分别导致 8.5% 至 45.5% 的活细胞百分比。流式细胞仪中活细胞的计数证实了显微镜计数获得的结果。在 4°C 下在 1.2 M NaCl 中获得的 VBNC 细胞显示出形态变化，减小了尺寸并将形态从杆菌变为球状。在受到酸或氧化剂化合物胁迫的细胞上未观察到形态变化。通过原子力显微镜（AFM）进行形态学表征。在 4°C 的 1.2 M NaCl 中储存可诱导沙门氏菌细胞中的 VBNC 状态超过 121 天，并且活细胞的百分比已达到 80.9% 以上。过乙酸和过氧化氢促进的更具侵略性的压力条件在最多 0.14 天的时间内诱导了 VBNC 状态，并分别导致 8.5% 至 45.5% 的活细胞百分比。流式细胞仪中活细胞的计数证实了显微镜计数获得的结果。在 4°C 下在 1.2 M NaCl 中获得的 VBNC 细胞显示出形态变化，减小了尺寸并将形态从细菌状变为球状。在受到酸或氧化剂化合物胁迫的细胞上未观察到形态变化。在 4°C 的 1.2 M NaCl 中储存可诱导沙门氏菌细胞中的 VBNC 状态超过 121 天，并且活细胞的百分比已达到 80.9% 以上。过乙酸和过氧化氢促进的更具侵略性的压力条件在最多 0.14 天的时间内诱导了 VBNC 状态，并分别导致 8.5% 至 45.5% 的活细胞百分比。流式细胞仪中活细胞的计数证实了显微镜计数获得的结果。在 4°C 下在 1.2 M NaCl 中获得的 VBNC 细胞显示出形态变化，减小了尺寸并将形态从杆菌变为球状。在受到酸或氧化剂化合物胁迫的细胞上未观察到形态变化。在 4°C 的 1.2 M NaCl 中储存可诱导沙门氏菌细胞中的 VBNC 状态超过 121 天，并且活细胞的百分比已达到 80.9% 以上。过乙酸和过氧化氢促进的更具侵略性的压力条件在最多 0.14 天的时间内诱导了 VBNC 状态，并分别导致 8.5% 至 45.5% 的活细胞百分比。流式细胞仪中活细胞的计数证实了显微镜计数获得的结果。在 4°C 下在 1.2 M NaCl 中获得的 VBNC 细胞显示出形态变化，减小了尺寸并将形态从杆菌变为球状。在受到酸或氧化剂化合物胁迫的细胞上没有观察到形态变化。活细胞百分比达到80.9%以上。过乙酸和过氧化氢促进的更具侵略性的压力条件在最多 0.14 天的时间内诱导了 VBNC 状态，并分别导致 8.5% 至 45.5% 的活细胞百分比。流式细胞仪中活细胞的计数证实了显微镜计数获得的结果。在 4°C 下在 1.2 M NaCl 中获得的 VBNC 细胞显示出形态变化，减小了尺寸并将形态从杆菌变为球状。在受到酸或氧化剂化合物胁迫的细胞上未观察到形态变化。活细胞百分比达到80.9%以上。过乙酸和过氧化氢促进的更具侵略性的压力条件在最多 0.14 天的时间内诱导了 VBNC 状态，并分别导致 8.5% 至 45.5% 的活细胞百分比。流式细胞仪中活细胞的计数证实了显微镜计数获得的结果。在 4°C 下在 1.2 M NaCl 中获得的 VBNC 细胞显示出形态变化，减小了尺寸并将形态从杆菌变为球状。在受到酸或氧化剂化合物胁迫的细胞上未观察到形态变化。流式细胞仪中活细胞的计数证实了显微镜计数获得的结果。在 4°C 下在 1.2 M NaCl 中获得的 VBNC 细胞显示出形态变化，减小了尺寸并将形态从杆菌变为球状。在受到酸或氧化剂化合物胁迫的细胞上未观察到形态变化。流式细胞仪中活细胞的计数证实了显微镜计数获得的结果。在 4°C 下在 1.2 M NaCl 中获得的 VBNC 细胞显示出形态变化，减小了尺寸并将形态从杆菌变为球状。在受到酸或氧化剂化合物胁迫的细胞上未观察到形态变化。