The aim of this study was to develop short- and long-term preservation protocols for European eel ovarian stem cells (OSCs) through hypothermic storage and cryopreservation of ovarian fragments that will assist in current conservation programs of this critically endangered species. Firstly, a freezing procedure was developed by testing different cryomedia and technical aspects of freezing. Utilization of 1.5 M of dimethyl sulfoxide (Me2SO), 0.1 M glucose and 1.5% BSA yielded optimal OSCs survival. Additionally, equilibration of 50-mg ovarian fragments for 30 min and plunging into lN2 at -80 °C displayed the highest OSC viability. Different cooling rates ranging from -1 to -40 °C/min did not significantly affect OSC viability when thawing in a 10 °C water bath. In addition, application of needle-immersed vitrification (NIV), combining ES3 (1.5 M PG and 1.5 M Me2SO) with VS3 (3 M PG and 3 M Me2SO) yielded the highest viability rates. Finally, hypothermic storage (4 °C) of ovarian fragments and ovarian cell suspensions displayed favorable viability of ∼90% after 48 h of storage and ∼65% after 72 h of storage. The development of OSC preservation methods presents an onset of further development of germline stem cell (GSC) manipulation techniques in this species. Cryopreservation of OSCs can enable a continuous supply of cells for either transplantation or in vitro cell culture thus enabling new and improved management and conservation strategies for this endangered species.

中文翻译：

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欧洲鳗（Anguilla anguilla）遗传资源保护的新策略：卵巢干细胞的冷冻保存

本研究的目的是通过低温储存和低温保存卵巢碎片为欧洲鳗鱼卵巢干细胞 (OSC) 制定短期和长期保存方案，这将有助于目前对这种极度濒危物种的保护计划。首先，通过测试不同的低温介质和冷冻技术方面开发了冷冻程序。使用 1.5 M 二甲基亚砜 (Me2SO)、0.1 M 葡萄糖和 1.5% BSA 可获得最佳 OSC 存活率。此外，将 50-mg 卵巢碎片平衡 30 分钟并在 -80 °C 下放入 lN2 显示出最高的 OSC 生存能力。在 10 °C 水浴中解冻时，从 -1 到 -40 °C/min 的不同冷却速率不会显着影响 OSC 的生存能力。此外，针浸玻璃化 (NIV) 的应用，结合 ES3 (1. 5 M PG 和 1.5 M Me2SO）与 VS3（3 M PG 和 3 M Me2SO）产生最高的存活率。最后，卵巢碎片和卵巢细胞悬液的低温储存 (4°C) 在储存 48 小时后显示出约 90% 的良好存活率，在储存 72 小时后显示出约 65% 的良好生存力。OSC 保存方法的发展代表了该物种生殖系干细胞 (GSC) 操作技术的进一步发展。OSC 的冷冻保存可以为移植或体外细胞培养提供持续的细胞供应，从而为这种濒危物种提供新的和改进的管理和保护策略。卵巢碎片和卵巢细胞悬液的低温储存 (4 °C) 在储存 48 小时后显示出约 90% 的良好存活率，在储存 72 小时后显示出约 65% 的良好存活率。OSC 保存方法的发展代表了该物种生殖系干细胞 (GSC) 操作技术的进一步发展。OSC 的冷冻保存可以为移植或体外细胞培养提供持续的细胞供应，从而为这种濒危物种提供新的和改进的管理和保护策略。卵巢碎片和卵巢细胞悬液的低温储存 (4 °C) 在储存 48 小时后显示出约 90% 的良好存活率，在储存 72 小时后显示出约 65% 的良好存活率。OSC 保存方法的发展代表了该物种生殖系干细胞 (GSC) 操作技术的进一步发展。OSC 的冷冻保存可以为移植或体外细胞培养提供持续的细胞供应，从而为这种濒危物种提供新的和改进的管理和保护策略。