Zika virus (ZIKV) reemergence poses a significant health threat especially due to its risks to fetal development, necessitating safe and effective vaccines that can protect pregnant women. Zika envelope domain III (ZE3) has been identified as a safe and effective vaccine candidate, however it is poorly immunogenic. We previously showed that plant-made recombinant immune complex (RIC) vaccines are a robust platform to improve the immunogenicity of weak antigens. In this study, we altered the antigen fusion site on the RIC platform to accommodate N-terminal fusion to the IgG heavy chain (N-RIC), and thus a wider range of antigens, with a resulting 40% improvement in RIC expression over the normal C-terminal fusion (C-RIC). Both types of RICs containing ZE3 were efficiently assembled in plants and purified to >95% homogeneity with a simple one-step purification. Both ZE3 RICs strongly bound complement receptor C1q and elicited strong ZE3-specific antibody titers that correlated with ZIKV neutralization. When either N-RIC or C-RIC was codelivered with plant-produced hepatitis B core (HBc) virus-like particles (VLP) displaying ZE3, the combination elicited 5-fold greater antibody titers (>1,000,000) and more strongly neutralized ZIKV than either RICs or VLPs alone, after only two doses without adjuvant. These findings demonstrate that antigens that require a free N-terminus for optimal antigen display can now be used with the RIC system, and that plant-made RICs and VLPs are highly effective vaccines targeting ZE3. Thus, the RIC platform can be more generally applied to a wider variety of antigens.

寨卡病毒（ZIKV）的再次出现对健康构成重大威胁，尤其是由于其对胎儿发育具有风险，因此需要安全有效的疫苗来保护孕妇。寨卡病毒包膜结构域III（ZE3）已被确认为安全有效的疫苗候选物，但其免疫原性较差。先前，我们显示了植物重组免疫复合物（RIC）疫苗是改善弱抗原免疫原性的强大平台。在这项研究中，我们改变了RIC平台上的抗原融合位点，以适应与IgG重链（N-RIC）的N端融合，从而使抗原的范围更广，与RIC相比，RIC的表达提高了40％。正常的C末端融合（C-RIC）。两种含ZE3的RIC均可在植物中高效组装并纯化至> 简单一步纯化即可实现95％的均质性。两种ZE3 RIC都强烈结合补体受体C1q，并引起与ZIKV中和相关的强ZE3特异性抗体效价。当N-RIC或C-RIC均与显示ZE3的植物产生的乙型肝炎核心（HBc）病毒样颗粒（VLP）一起编码传递时，该组合所产生的抗体滴度（> 1,000,000）和中和的ZIKV较之高出5倍在没有佐剂的情况下仅两次剂量后，单独使用RIC或VLP。这些发现表明，需要一个自由的N末端来实现最佳抗原展示的抗原现在可以与RIC系统一起使用，而植物制成的RIC和VLP是靶向ZE3的高效疫苗。因此，RIC平台可以更普遍地应用于更广泛的抗原。两种ZE3 RIC都强烈结合补体受体C1q，并引起与ZIKV中和相关的强ZE3特异性抗体效价。当N-RIC或C-RIC均与显示ZE3的植物产生的乙型肝炎核心（HBc）病毒样颗粒（VLP）一起编码传递时，该组合所产生的抗体滴度（> 1,000,000）和中和的ZIKV较之高出5倍在没有佐剂的情况下仅两次剂量后，单独使用RIC或VLP。这些发现表明，需要一个自由的N末端来实现最佳抗原展示的抗原现在可以与RIC系统一起使用，而植物制成的RIC和VLP是靶向ZE3的高效疫苗。因此，RIC平台可以更普遍地应用于更广泛的抗原。两种ZE3 RIC都强烈结合补体受体C1q，并引起与ZIKV中和相关的强ZE3特异性抗体效价。当N-RIC或C-RIC均与显示ZE3的植物产生的乙型肝炎核心（HBc）病毒样颗粒（VLP）一起编码传递时，该组合所产生的抗体滴度（> 1,000,000）和中和的ZIKV较之高出5倍在没有佐剂的情况下仅两次剂量后，单独使用RIC或VLP。这些发现表明，需要一个自由的N末端来实现最佳抗原展示的抗原现在可以与RIC系统一起使用，而植物制成的RIC和VLP是靶向ZE3的高效疫苗。因此，RIC平台可以更普遍地应用于更广泛的抗原。当N-RIC或C-RIC均与显示ZE3的植物产生的乙型肝炎核心（HBc）病毒样颗粒（VLP）一起编码传递时，该组合所产生的抗体滴度（> 1,000,000）和中和的ZIKV较之高出5倍在没有佐剂的情况下仅两次剂量后，单独使用RIC或VLP。这些发现表明，需要一个自由的N末端来实现最佳抗原展示的抗原现在可以与RIC系统一起使用，而植物制成的RIC和VLP是靶向ZE3的高效疫苗。因此，RIC平台可以更普遍地应用于更广泛的抗原。当N-RIC或C-RIC均与显示ZE3的植物产生的乙型肝炎核心（HBc）病毒样颗粒（VLP）一起编码传递时，该组合所产生的抗体滴度（> 1,000,000）和中和的ZIKV较之高出5倍在没有佐剂的情况下仅两次剂量后，单独使用RIC或VLP。这些发现表明，需要一个自由的N末端来实现最佳抗原展示的抗原现在可以与RIC系统一起使用，而植物制成的RIC和VLP是靶向ZE3的高效疫苗。因此，RIC平台可以更普遍地应用于更广泛的抗原。000），并且在仅两次不加佐剂的情况下，比单独使用RIC或VLP更强地中和ZIKV。这些发现表明，需要一个自由的N末端来实现最佳抗原展示的抗原现在可以与RIC系统一起使用，而植物制成的RIC和VLP是靶向ZE3的高效疫苗。因此，RIC平台可以更普遍地应用于更广泛的抗原。000），并且在仅两次不加佐剂的情况下，比单独使用RIC或VLP更强地中和ZIKV。这些发现表明，需要一个自由的N末端来实现最佳抗原展示的抗原现在可以与RIC系统一起使用，而植物制成的RIC和VLP是靶向ZE3的高效疫苗。因此，RIC平台可以更普遍地应用于更广泛的抗原。