Human immunodeficiency virus (HIV) uses the ESCRT (endosomal sorting complexes required for transport) protein pathway to bud from infected cells. Despite the roles of ESCRT-I and -III in HIV budding being firmly established, participation of ESCRT-II in this process has been controversial. EAP45 is a critical component of ESCRT-II. Previously, we utilised a CRISPR-Cas9 EAP45 knockout cell line to assess the involvement of ESCRT-II in HIV replication. We demonstrated that the absence of ESCRT-II impairs HIV budding. Here, we show that virus spread is also defective in physiologically relevant CRISPR/Cas9 EAP45 knockout T cells. We further show reappearance of efficient budding by re-introduction of EAP45 expression into EAP45 knockout cells. Using expression of selected mutants of EAP45, we dissect the domain requirement responsible for this function. Our data show at the steady state that rescue of budding is only observed in the context of a Gag/Pol, but not a Gag expressor, indicating that the size of cargo determines the usage of ESCRT-II. EAP45 acts through the YPXL-ALIX pathway as partial rescue is achieved in a PTAP but not a YPXL mutant virus. Our study clarifies the role of ESCRT-II in the late stages of HIV replication and reinforces the notion that ESCRT-II plays an integral part during this process as it does in sorting ubiquitinated cargos and in cytokinesis.

中文翻译：

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ESCRT-II 通过在人类免疫缺陷病毒 1 出芽中与 ESCRT-I 连接而发挥作用。

人类免疫缺陷病毒 (HIV) 使用 ESCRT（运输所需的内体分选复合物）蛋白途径从受感染的细胞中萌芽。尽管 ESCRT-I 和 -III 在 HIV 萌芽中的作用已经牢固确立，但 ESCRT-II 参与这一过程一直存在争议。EAP45 是 ESCRT-II 的重要组成部分。以前，我们利用 CRISPR-Cas9 EAP45 敲除细胞系来评估 ESCRT-II 参与 HIV 复制。我们证明了缺乏 ESCRT-II 会损害 HIV 萌芽。在这里，我们表明病毒传播在生理相关的 CRISPR/Cas9 EAP45 敲除 T 细胞中也存在缺陷。我们通过将 EAP45 表达重新引入 EAP45 敲除细胞，进一步显示了有效出芽的再现。使用选定的 EAP45 突变体的表达，我们剖析了负责此功能的领域需求。我们的数据显示，在稳定状态下，仅在 Gag/Pol 的背景下观察到萌芽的拯救，而不是 Gag 表达器，这表明货物的大小决定了 ESCRT-II 的使用。EAP45 通过 YPXL-ALIX 途径起作用，因为在 PTAP 而非 YPXL 突变病毒中实现了部分拯救。我们的研究阐明了 ESCRT-II 在 HIV 复制后期阶段的作用，并强化了 ESCRT-II 在该过程中起着不可或缺的作用的观点，就像它在分拣泛素化货物和胞质分裂中一样。EAP45 通过 YPXL-ALIX 途径起作用，因为在 PTAP 而非 YPXL 突变病毒中实现了部分拯救。我们的研究阐明了 ESCRT-II 在 HIV 复制后期阶段的作用，并强化了 ESCRT-II 在该过程中起着不可或缺的作用的观点，就像它在分拣泛素化货物和胞质分裂中一样。EAP45 通过 YPXL-ALIX 途径起作用，因为在 PTAP 而非 YPXL 突变病毒中实现了部分拯救。我们的研究阐明了 ESCRT-II 在 HIV 复制后期阶段的作用，并强化了 ESCRT-II 在该过程中起着不可或缺的作用的观点，就像它在分拣泛素化货物和胞质分裂中一样。