This study aimed to characterize the full-length cDNA of IRE1 from fish Megalobrama amblycephala and investigate its role in the pro-inflammatory response. A full-length cDNA coding IRE1 was cloned from blunt snout bream by RT-PCR and RACE approaches. The cDNA obtained covered 3665 bp with an open reading frame of 3096 bp encoding 1031 amino acids. Sequence alignment and phylogenetic analysis revealed a high degree of conservation (74-92%) among various species, retaining one signal peptide, one luminal domain, one serine/threonine kinase domain, one RNase domain, one activation loop, two N-linked glycosylation sites, and several phosphorylation sites. The highest IRE1 expression was observed in the trunk kidney followed by the brain and spleen, whereas relatively low expression levels were detected in the liver, intestine, adipose, skin, and heart. After lipopolysaccharide (LPS) challenge, the expressions of glucose-regulated protein 78 (GRP78), inositol-requiring enzyme 1 (IRE1), spliced X-box binding protein 1 (XBP1s), C/EBP homologous protein (CHOP), nuclear factor kappa B (NF-κB), tumor necrosis factor alpha (TNFα), and interleukin-6 (IL-6) all increased remarkably in the spleen and brain at different sampling time points, while LPS also upregulated all the genes tested in the intestine except C/EBP homologous protein. Overall, the results indicated that the IRE1 gene of Megalobrama amblycephala shared a high similarity compared with other vertebrates including several bony fish species. Its expression in three tissues was induced remarkably by the LPS challenge, which indicated that IRE1 played a vital role in LPS-induced inflammation on fish.

中文翻译：

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钝口鼻out（Megalobrama amblycephala）中需要肌醇的酶1（IRE1）的分子特征和表达模式：IRE1在脂多糖诱导的炎症反应中的作用。

这项研究的目的是表征鱼类双翅目无翅目IRE1的全长cDNA，并研究其在促炎反应中的作用。通过RT-PCR和RACE方法从钝鼻sn中克隆了编码IRE1的全长cDNA。获得的cDNA覆盖了3665 bp，具有3096 bp的开放阅读框，编码1031个氨基酸。序列比对和系统发育分析表明，在各种物种中高度保守（74-92％），保留了一个信号肽，一个腔结构域，一个丝氨酸/苏氨酸激酶结构域，一个RNase结构域，一个激活环，两个N-联糖基化位和几个磷酸化位点。IRE1的最高表达出现在躯干肾脏中，其次是大脑和脾脏，而在肝脏，肠，脂肪，皮肤，和心。脂多糖（LPS）攻击后，葡萄糖调节蛋白78（GRP78），肌醇需要酶1（IRE1），剪接X-box结合蛋白1（XBP1s），C / EBP同源蛋白（CHOP），核因子的表达在不同的采样时间，脾脏和大脑中的κB（NF-κB），肿瘤坏死因子α（TNFα）和白细胞介素6（IL-6）均显着增加，而脂多糖也上调了肠道中测试的所有基因除了C / EBP同源蛋白。总体而言，结果表明，与其他脊椎动物（包括几种带骨鱼类）相比，a头巨耳纲的IRE1基因具有高度相似性。LPS攻击显着诱导了其在三个组织中的表达，这表明IRE1在LPS诱导的鱼类炎症中起着至关重要的作用。脂多糖（LPS）攻击后，葡萄糖调节蛋白78（GRP78），肌醇需要酶1（IRE1），剪接的X-box结合蛋白1（XBP1s），C / EBP同源蛋白（CHOP），核因子的表达在不同的采样时间，脾脏和大脑中的κB（NF-κB），肿瘤坏死因子α（TNFα）和白细胞介素6（IL-6）均显着增加，而脂多糖也上调了肠道中测试的所有基因除了C / EBP同源蛋白。总体而言，结果表明，与其他脊椎动物（包括几种带骨鱼类）相比，a头巨耳纲的IRE1基因具有高度相似性。LPS攻击显着诱导了其在三个组织中的表达，这表明IRE1在LPS诱导的鱼类炎症中起着至关重要的作用。脂多糖（LPS）攻击后，葡萄糖调节蛋白78（GRP78），肌醇需要酶1（IRE1），剪接的X-box结合蛋白1（XBP1s），C / EBP同源蛋白（CHOP），核因子的表达在不同的采样时间，脾脏和大脑中的κB（NF-κB），肿瘤坏死因子α（TNFα）和白细胞介素6（IL-6）均显着增加，而脂多糖也上调了肠道中测试的所有基因除了C / EBP同源蛋白。总体而言，结果表明，与其他脊椎动物（包括几种带骨鱼类）相比，a头巨耳纲的IRE1基因具有高度相似性。LPS攻击显着诱导了其在三个组织中的表达，这表明IRE1在LPS诱导的鱼类炎症中起着至关重要的作用。葡萄糖调节蛋白78（GRP78），肌醇需要酶1（IRE1），剪接X-box结合蛋白1（XBP1s），C / EBP同源蛋白（CHOP），核因子κB（NF-κB）的表达在不同的采样时间，脾脏和大脑中的肿瘤坏死因子α（TNFα）和白细胞介素6（IL-6）均显着增加，而LPS还上调了除C / EBP同源蛋白外在肠中测试的所有基因。总体而言，结果表明，与其他脊椎动物（包括几种骨鱼类）相比，无翅巨耳纲的IRE1基因具有高度相似性。LPS攻击显着诱导了其在三个组织中的表达，这表明IRE1在LPS诱导的鱼类炎症中起着至关重要的作用。葡萄糖调节蛋白78（GRP78），肌醇需要酶1（IRE1），剪接X-box结合蛋白1（XBP1s），C / EBP同源蛋白（CHOP），核因子κB（NF-κB）的表达在不同的采样时间，脾脏和大脑中的肿瘤坏死因子α（TNFα）和白细胞介素6（IL-6）均显着增加，而LPS还上调了除C / EBP同源蛋白外在肠中测试的所有基因。总体而言，结果表明，与其他脊椎动物（包括几种带骨鱼类）相比，a头巨耳纲的IRE1基因具有高度相似性。LPS攻击显着诱导了其在三个组织中的表达，这表明IRE1在LPS诱导的鱼类炎症中起着至关重要的作用。剪接的X-box结合蛋白1（XBP1s），C / EBP同源蛋白（CHOP），核因子κB（NF-κB），肿瘤坏死因子α（TNFα）和白介素6（IL-6）均显着增加在不同采样时间点，它们在脾脏和大脑中的表达水平升高，而LPS还上调了除了C / EBP同源蛋白外在肠道中测试的所有基因。总体而言，结果表明，与其他脊椎动物（包括几种带骨鱼类）相比，a头巨耳纲的IRE1基因具有高度相似性。LPS攻击显着诱导了其在三个组织中的表达，这表明IRE1在LPS诱导的鱼类炎症中起着至关重要的作用。剪接的X-box结合蛋白1（XBP1s），C / EBP同源蛋白（CHOP），核因子κB（NF-κB），肿瘤坏死因子α（TNFα）和白介素6（IL-6）均显着增加在不同采样时间点，它们在脾脏和大脑中的表达水平升高，而LPS还上调了除了C / EBP同源蛋白外在肠道中测试的所有基因。总体而言，结果表明，与其他脊椎动物（包括几种骨鱼类）相比，无翅巨耳纲的IRE1基因具有高度相似性。LPS攻击显着诱导了其在三个组织中的表达，这表明IRE1在LPS诱导的鱼类炎症中起着至关重要的作用。在不同的采样时间，脾脏和大脑中IL-6和IL-6的含量均显着增加，而LPS还上调了除C / EBP同源蛋白外在肠中测试的所有基因。总体而言，结果表明，与其他脊椎动物（包括几种骨鱼类）相比，无翅巨耳纲的IRE1基因具有高度相似性。LPS攻击显着诱导了其在三个组织中的表达，这表明IRE1在LPS诱导的鱼类炎症中起着至关重要的作用。在不同的采样时间，脾脏和大脑中IL-6和IL-6的含量均显着增加，而LPS还上调了除C / EBP同源蛋白外在肠中测试的所有基因。总体而言，结果表明，与其他脊椎动物（包括几种骨鱼类）相比，无翅巨耳纲的IRE1基因具有高度相似性。LPS攻击显着诱导了其在三个组织中的表达，这表明IRE1在LPS诱导的鱼类炎症中起着至关重要的作用。