BACKGROUND Oxidative stress mediates the nerve injury during the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). Protecting against oxidative stress damage is an important strategy to prevent and treat AD. Di-Huang-Yi-Zhi (DHYZ) is a Chinese medicine used for the treatment of AD, but its mechanism remains unknown. This study is aimed to investigate the effect of DHYZ on H2O2 induced oxidative damage in PC12 cells. METHODS PC12 cells were treated with H2O2 and DHYZ. Cell proliferation was detected by Cell counting kit-8 (CCK-8) assay. Cytotoxicity of H2O2 was measured by lactate dehydrogenase (LDH) release assay. Apoptosis were identified by Annexin V-FITC/PI staining. Caspase 3 activity was detected by commercial kit. Mitochondrial membrane potential (MMP) was detected by JC-1 staining. Reactive oxygen species (ROS) was 2', 7'-Dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) staining. Protein expression and phosphorylation was identified by western blot. RESULTS The results showed that DHYZ antagonized H2O2-mediated cytotoxicity and proliferation inhibition. DHYZ reduced ROS production, stabilize mitochondrial membrane potential, inhibit Caspase-3 activity and apoptosis induced by H2O2. In addition, DHYZ inhibited the phosphorylation of ASK1, JNK1/2/3 and p38 MAPK which were up-regulated by H2O2. CONCLUSIONS The present study suggested that DHYZ protected PC12 cells from H2O2-induced oxidative stress damage and was related to inhibition of ROS production and ASK1-JNK/p38 MAPK signaling. The present study provides experimental evidence for the application of DHYZ for the management of oxidative stress damage and AD.

中文翻译：

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中药地黄益智通过调节ROS-ASK1-JNK/p38 MAPK信号通路保护PC12细胞免于H2O2诱导的细胞凋亡。

背景技术氧化应激介导阿尔茨海默病(AD)发病过程中的神经损伤。防止氧化应激损伤是预防和治疗 AD 的重要策略。地黄益智（DHYZ）是一种用于治疗AD的中药，但其作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨 DHYZ 对 H2O2 诱导的 PC12 细胞氧化损伤的影响。方法 PC12 细胞用 H2O2 和 DHYZ 处理。通过细胞计数试剂盒8（CCK-8）测定法检测细胞增殖。H2O2 的细胞毒性通过乳酸脱氢酶 (LDH) 释放测定法测量。通过膜联蛋白 V-FITC/PI 染色鉴定细胞凋亡。通过商业试剂盒检测 Caspase 3 活性。JC-1染色检测线粒体膜电位（MMP）。活性氧 (ROS) 为 2', 7' -二氯二氢荧光素二乙酸酯 (DCFH-DA) 染色。通过蛋白质印迹鉴定蛋白质表达和磷酸化。结果结果表明，DHYZ拮抗H2O2介导的细胞毒性和增殖抑制作用。DHYZ 减少 ROS 的产生，稳定线粒体膜电位，抑制 H2O2 诱导的 Caspase-3 活性和细胞凋亡。此外，DHYZ 抑制被 H2O2 上调的 ASK1、JNK1/2/3 和 p38 MAPK 的磷酸化。结论 本研究表明 DHYZ 保护 PC12 细胞免受 H2O2 诱导的氧化应激损伤，并且与抑制 ROS 产生和 ASK1-JNK/p38 MAPK 信号传导有关。本研究为应用 DHYZ 治疗氧化应激损伤和 AD 提供了实验证据。通过蛋白质印迹鉴定蛋白质表达和磷酸化。结果结果表明，DHYZ拮抗H2O2介导的细胞毒性和增殖抑制作用。DHYZ 减少 ROS 的产生，稳定线粒体膜电位，抑制 H2O2 诱导的 Caspase-3 活性和细胞凋亡。此外，DHYZ 抑制被 H2O2 上调的 ASK1、JNK1/2/3 和 p38 MAPK 的磷酸化。结论 本研究表明 DHYZ 保护 PC12 细胞免受 H2O2 诱导的氧化应激损伤，并且与抑制 ROS 产生和 ASK1-JNK/p38 MAPK 信号传导有关。本研究为应用 DHYZ 治疗氧化应激损伤和 AD 提供了实验证据。通过蛋白质印迹鉴定蛋白质表达和磷酸化。结果结果表明，DHYZ拮抗H2O2介导的细胞毒性和增殖抑制作用。DHYZ 减少 ROS 的产生，稳定线粒体膜电位，抑制 H2O2 诱导的 Caspase-3 活性和细胞凋亡。此外，DHYZ 抑制被 H2O2 上调的 ASK1、JNK1/2/3 和 p38 MAPK 的磷酸化。结论 本研究表明 DHYZ 保护 PC12 细胞免受 H2O2 诱导的氧化应激损伤，并且与抑制 ROS 产生和 ASK1-JNK/p38 MAPK 信号传导有关。本研究为应用 DHYZ 治疗氧化应激损伤和 AD 提供了实验证据。结果结果表明，DHYZ拮抗H2O2介导的细胞毒性和增殖抑制作用。DHYZ 减少 ROS 的产生，稳定线粒体膜电位，抑制 H2O2 诱导的 Caspase-3 活性和细胞凋亡。此外，DHYZ 抑制被 H2O2 上调的 ASK1、JNK1/2/3 和 p38 MAPK 的磷酸化。结论 本研究表明 DHYZ 保护 PC12 细胞免受 H2O2 诱导的氧化应激损伤，并且与抑制 ROS 产生和 ASK1-JNK/p38 MAPK 信号传导有关。本研究为应用 DHYZ 治疗氧化应激损伤和 AD 提供了实验证据。结果结果表明，DHYZ拮抗H2O2介导的细胞毒性和增殖抑制作用。DHYZ 减少 ROS 的产生，稳定线粒体膜电位，抑制 H2O2 诱导的 Caspase-3 活性和细胞凋亡。此外，DHYZ 抑制被 H2O2 上调的 ASK1、JNK1/2/3 和 p38 MAPK 的磷酸化。结论 本研究表明 DHYZ 保护 PC12 细胞免受 H2O2 诱导的氧化应激损伤，并且与抑制 ROS 产生和 ASK1-JNK/p38 MAPK 信号传导有关。本研究为应用 DHYZ 治疗氧化应激损伤和 AD 提供了实验证据。此外，DHYZ 抑制被 H2O2 上调的 ASK1、JNK1/2/3 和 p38 MAPK 的磷酸化。结论 本研究表明 DHYZ 保护 PC12 细胞免受 H2O2 诱导的氧化应激损伤，并且与抑制 ROS 产生和 ASK1-JNK/p38 MAPK 信号传导有关。本研究为应用 DHYZ 治疗氧化应激损伤和 AD 提供了实验证据。此外，DHYZ 抑制被 H2O2 上调的 ASK1、JNK1/2/3 和 p38 MAPK 的磷酸化。结论 本研究表明 DHYZ 保护 PC12 细胞免受 H2O2 诱导的氧化应激损伤，并且与抑制 ROS 产生和 ASK1-JNK/p38 MAPK 信号传导有关。本研究为应用 DHYZ 治疗氧化应激损伤和 AD 提供了实验证据。