Intracellular functional peptides with important roles in cells have been widely studied as regulators of cellular activity. Previously, we proposed a screening system for identifying intracellular functional peptides, which can be utilized to synthesize various cell-penetrating peptide (CPP)-functional peptide complexes, and the intracellular functions of the peptides can then be determined using various cell based assays. We demonstrated that the activity of a cell death-inducing peptide was increased by an amino acid substitution. However, covalent conjugation of CPPs with functional peptides may disrupt the biological characteristics of the functional peptides. In the present study, we developed a novel screening system for intracellular functional peptides combined with a dissociation system after delivery inside cells to eliminate the influence of CPPs. To construct this system, we developed a method for synthesizing CPP-functional peptide hetero-dimers containing a disulfide bond that is cleaved by the intracellular reducing environment. The system used Fmoc-Lys(ivDde)-OH to synthesize CPP and functional peptides in one molecule to selectively form a disulfide bond of hetero-dimeric peptides. Furthermore, we evaluated a single amino acid substitution library of the cell death inducing peptide (WELVVLGKL). We obtained 6 peptides with higher activity than the original peptide. Our results suggest that our new screening system can be eliminate the influence of CPPs and is useful for peptide screening inside cells.

在细胞中具有重要作用的细胞内功能肽已被广泛研究为细胞活性的调节剂。以前，我们提出了一种用于识别细胞内功能性肽的筛选系统，该系统可用于合成各种细胞穿透肽（CPP）-功能性肽复合物，然后可以使用各种基于细胞的测定法来确定肽的细胞内功能。我们证明了通过氨基酸取代增加了细胞死亡诱导肽的活性。然而，CPP与功能性肽的共价缀合可能破坏功能性肽的生物学特性。在目前的研究中，我们开发了一种新型的细胞内功能性肽筛选系统，并结合在细胞内释放后的解离系统消除了CPP的影响。为了构建该系统，我们开发了一种合成CPP功能性肽异二聚体的方法，该异二聚体含有被细胞内还原环境裂解的二硫键。该系统使用Fmoc-Lys（ivDde）-OH在一个分子中合成CPP和功能性肽，以选择性地形成异二聚体肽的二硫键。此外，我们评估了细胞死亡诱导肽（WELVVLGKL）的单个氨基酸取代文库。我们获得了6种比原始肽具有更高活性的肽。我们的结果表明，我们的新筛选系统可以消除CPP的影响，对于细胞内的肽筛选非常有用。为了构建该系统，我们开发了一种合成CPP功能性肽异二聚体的方法，该异二聚体含有被细胞内还原环境裂解的二硫键。该系统使用Fmoc-Lys（ivDde）-OH在一个分子中合成CPP和功能性肽，以选择性地形成异二聚体肽的二硫键。此外，我们评估了细胞死亡诱导肽（WELVVLGKL）的单个氨基酸取代文库。我们获得了6种比原始肽具有更高活性的肽。我们的结果表明，我们的新筛选系统可以消除CPP的影响，对于细胞内的肽筛选非常有用。为了构建该系统，我们开发了一种用于合成CPP功能性肽异二聚体的方法，该异二聚体含有被细胞内还原环境裂解的二硫键。该系统使用Fmoc-Lys（ivDde）-OH在一个分子中合成CPP和功能性肽，以选择性地形成异二聚体肽的二硫键。此外，我们评估了细胞死亡诱导肽（WELVVLGKL）的单个氨基酸取代文库。我们获得了6种比原始肽具有更高活性的肽。我们的结果表明，我们的新筛选系统可以消除CPP的影响，对于细胞内的肽筛选非常有用。该系统使用Fmoc-Lys（ivDde）-OH在一个分子中合成CPP和功能性肽，以选择性地形成异二聚体肽的二硫键。此外，我们评估了细胞死亡诱导肽（WELVVLGKL）的单个氨基酸取代文库。我们获得了6种比原始肽具有更高活性的肽。我们的结果表明，我们的新筛选系统可以消除CPP的影响，对于细胞内的肽筛选非常有用。该系统使用Fmoc-Lys（ivDde）-OH在一个分子中合成CPP和功能性肽，以选择性地形成异二聚体肽的二硫键。此外，我们评估了细胞死亡诱导肽（WELVVLGKL）的单个氨基酸取代文库。我们获得了6种比原始肽具有更高活性的肽。我们的结果表明，我们的新筛选系统可以消除CPP的影响，对于细胞内的肽筛选非常有用。