Wnt signalling mediates complex cell-cellinteractions during development and proliferation. Annexin A8 (AnxA8), a calcium-dependent phospholipid-binding protein, and canonical Wnt signalling mechanisms have both been implicated in retinal pigment epithelial (RPE) cell differentiation. The aim here was to examine the possibility of cross-talk between AnxA8 and Wnt signalling, as both are down-regulated upon fenretinide (FR)-mediated RPE transdifferentiation. AnxA8 suppression in RPE cells via siRNA or administration of FR induced neuronal-like cell transdifferentiation and reduced expression of Wnt-related genes, as measured by real-time PCR and western blotting. AnxA8 gene expression, on the other hand, remained unaltered upon manipulating Wnt signalling, suggesting Wnt-related genes to be downstream effectors of AnxA8. Co-immunoprecipitation revealed an interaction between AnxA8 and β-catenin, which was reduced in the presence of activated TGF-β1. TGF-β1 signalling also reversed the AnxA8 loss-induced cell morphology changes, and induced β-catenin translocation and GSK-3β phosphorylation in the absence of AnxA8. Ectopic over-expression of AnxA8 led to an increase in active β-catenin and GSK-3β phosphorylation. These data demonstrate an important role for AnxA8 as a regulator of Wnt signalling and a determinant of RPE phenotype, with implications for regenerative medicine approaches that utilise stem cell-derived RPE cells to treat conditions such as age-related macular degeneration.

中文翻译：

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Annexin A8 调节 Wnt 信号以维持视网膜色素上皮细胞的表型可塑性。

Wnt 信号在发育和增殖过程中介导复杂的细胞间相互作用。膜联蛋白 A8 (AnxA8)、一种钙依赖性磷脂结合蛋白和经典的 Wnt 信号传导机制都与视网膜色素上皮 (RPE) 细胞分化有关。这里的目的是检查 AnxA8 和 Wnt 信号传导之间的串扰的可能性，因为两者都在芬维A胺 (FR) 介导的 RPE 转分化时下调。通过实时 PCR 和蛋白质印迹测量，通过 siRNA 或给予 FR 抑制 RPE 细胞中的 AnxA8 诱导神经元样细胞转分化并降低 Wnt 相关基因的表达。另一方面，AnxA8 基因表达在操纵 Wnt 信号时保持不变，这表明 Wnt 相关基因是 AnxA8 的下游效应子。免疫共沉淀揭示了 AnxA8 和 β-连环蛋白之间的相互作用，这种相互作用在活化的 TGF-β1 存在下减少。TGF-β1 信号传导还逆转了 AnxA8 缺失诱导的细胞形态变化，并在没有 AnxA8 的情况下诱导 β-连环蛋白易位和 GSK-3β 磷酸化。AnxA8 的异位过表达导致活性 β-连环蛋白和 GSK-3β 磷酸化增加。这些数据表明 AnxA8 作为 Wnt 信号的调节剂和 RPE 表型的决定因素具有重要作用，这对利用干细胞衍生的 RPE 细胞治疗年龄相关性黄斑变性等疾病的再生医学方法具有重要意义。在没有 AnxA8 的情况下诱导 β-连环蛋白易位和 GSK-3β 磷酸化。AnxA8 的异位过表达导致活性 β-连环蛋白和 GSK-3β 磷酸化增加。这些数据表明 AnxA8 作为 Wnt 信号的调节剂和 RPE 表型的决定因素具有重要作用，这对利用干细胞衍生的 RPE 细胞治疗年龄相关性黄斑变性等疾病的再生医学方法具有重要意义。在没有 AnxA8 的情况下诱导 β-连环蛋白易位和 GSK-3β 磷酸化。AnxA8 的异位过表达导致活性 β-连环蛋白和 GSK-3β 磷酸化增加。这些数据表明 AnxA8 作为 Wnt 信号的调节剂和 RPE 表型的决定因素具有重要作用，这对利用干细胞衍生的 RPE 细胞治疗年龄相关性黄斑变性等疾病的再生医学方法具有重要意义。