Functional properties of each enzyme strictly depend on immobilization protocol used for linking enzyme and carrier. Different strategies were applied to prepare the immobilized derivatives of Rhizomucor miehei lipase (RML) and chemically aminated RML (NH2-RML). Both RML and NH2-RML forms were covalently immobilized on glyoxyl sepharose (Gx-RML and Gx-NH2-RML), glyoxyl sepharose dithiothreitol (Gx-DTT-RML and Gx-DTT-NH2-RML), activated sepharose with cyanogen bromide (CNBr-RML and CNBr-NH2-RML) and heterofunctional epoxy support partially modified with iminodiacetic acid (epoxy-IDA-RML and epoxy-IDA-NH2-RML). Immobilization varied from 11% up to 88% yields producing specific activities ranging from 0.5 up to 1.9 UI/mg. Great improvement in thermal stability for Gx-DTT-NH2-RML and epoxy-IDA-NH2-RML derivatives was obtained by retaining 49% and 37% of their initial activities at 70 °C, respectively. The regioselectivity of each derivative was also examined in hydrolysis of fish oil at three different conditions. All the derivatives were selective between cis-5,8,11,14,17-eicosapentaenoic acid (EPA) and cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid (DHA) in favor of EPA. The highest selectivity (32.9 folds) was observed for epoxy-IDA-NH2-RML derivative in the hydrolysis reaction performed at pH 5 and 4 °C. Recyclability study showed good capability of the immobilized biocatalysts to be used repeatedly, retaining 50–91% of their initial activities after five cycles of the reaction.

中文翻译：

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鱼油选择性水解不同固定化策略对米黑根霉脂肪酶催化性能的精细调控

每种酶的功能特性严格取决于用于连接酶和载体的固定化方案。应用不同的策略来制备米黑根霉脂肪酶 (RML) 和化学胺化 RML (NH2-RML) 的固定化衍生物。RML 和 NH2-RML 形式共价固定在乙醛琼脂糖（Gx-RML 和 Gx-NH2-RML）、乙醛琼脂糖二硫苏糖醇（Gx-DTT-RML 和 Gx-DTT-NH2-RML）、用溴化氰活化的琼脂糖上（ CNBr-RML 和 CNBr-NH2-RML) 和用亚氨基二乙酸部分改性的异官能环氧载体（环氧-IDA-RML 和环氧-IDA-NH2-RML）。固定化的产量从 11% 到 88% 不等，产生的比活性范围从 0.5 到 1.9 UI/mg。Gx-DTT-NH2-RML 和环氧-IDA-NH2-RML 衍生物在 70 °C 时分别保持初始活性的 49% 和 37%，从而大大提高了热稳定性。还在三种不同条件下在鱼油水解中检测了每种衍生物的区域选择性。所有衍生物在顺式 5,8,11,14,17-二十碳五烯酸 (EPA) 和顺式 4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸 (DHA) 之间都有选择性，有利于 EPA。在 pH 5 和 4 °C 下进行的水解反应中，环氧-IDA-NH2-RML 衍生物的选择性最高（32.9 倍）。可回收性研究表明，固定化生物催化剂具有良好的重复使用能力，在五个反应循环后仍能保留 50-91% 的初始活性。还在三种不同条件下在鱼油水解中检测了每种衍生物的区域选择性。所有衍生物都在顺式 5,8,11,14,17-二十碳五烯酸 (EPA) 和顺式 4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸 (DHA) 之间具有选择性，有利于 EPA。在 pH 5 和 4 °C 下进行的水解反应中，环氧-IDA-NH2-RML 衍生物的选择性最高（32.9 倍）。可回收性研究表明，固定化生物催化剂具有良好的重复使用能力，在五个反应循环后仍能保留 50-91% 的初始活性。还在三种不同条件下在鱼油水解中检测了每种衍生物的区域选择性。所有衍生物在顺式 5,8,11,14,17-二十碳五烯酸 (EPA) 和顺式 4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸 (DHA) 之间都有选择性，有利于 EPA。在 pH 5 和 4 °C 下进行的水解反应中，环氧-IDA-NH2-RML 衍生物的选择性最高（32.9 倍）。可回收性研究表明，固定化生物催化剂具有良好的重复使用能力，在五个反应循环后仍能保留 50-91% 的初始活性。在 pH 5 和 4 °C 下进行的水解反应中，环氧-IDA-NH2-RML 衍生物观察到了 9 倍）。可回收性研究表明，固定化生物催化剂具有良好的重复使用能力，在五个反应循环后仍能保留 50-91% 的初始活性。在 pH 5 和 4 °C 下进行的水解反应中，环氧-IDA-NH2-RML 衍生物观察到了 9 倍）。可回收性研究表明，固定化生物催化剂具有良好的重复使用能力，在五个反应循环后仍能保留 50-91% 的初始活性。