The variability of trace metals in cell culture media is a potential manufacturing concern because it may significantly affect the production and quality of therapeutic proteins. Variability in trace metals in CHO cell culture has been shown to impact critical production metrics such as cell growth, viability, nutrient consumption, and production of recombinant proteins. To better understand the influence of excess supplementation, zinc and copper were initially supplemented with 50-μM concentrations to determine the impact on the production and quality of β-glucuronidase, a lysosomal enzyme, in a parallel bioreactor system. Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), a metal chelator, was included as another treatment to induce a depletion of trace metal bioavailability to examine deficiency. Samples were drawn daily to monitor cell growth and viability, nutrient levels, β-glucuronidase activity, and trace zinc flux. Cell cycle analysis revealed the inhibition of sub-G0/G1 species in zinc supplemented cultures, maintaining higher viability compared to the control, EDTA-, and copper-supplemented cultures. Enzyme activity analysis in the harvests revealed higher specific activity of β-glucuronidase in reactors supplemented with zinc. A confirmation run was conducted with supplementations of zinc at concentrations of 50, 100, and 150 μM. Further cell cycle analysis and caspase-3 analysis demonstrated the role of zinc as an apoptosis suppressor responsible for the enhanced harvest purity of β-glucuronidase from zinc-supplemented bioreactors.

中文翻译：

---

补锌可以通过抑制细胞凋亡来提高CHO细胞培养物中β-葡萄糖醛酸酶的收获纯度。

细胞培养基中微量金属的变异性是潜在的制造问题，因为它可能会显着影响治疗性蛋白质的生产和质量。CHO细胞培养物中痕量金属的变化已显示出影响关键的生产指标，例如细胞生长，生存力，营养消耗和重组蛋白的生产。为了更好地了解过量补充的影响，最初在锌和铜中添加了50μM的浓度，以确定在平行生物反应器系统中对溶酶体酶β-葡萄糖醛酸苷酶的生产和质量的影响。乙二胺四乙酸（EDTA）是一种金属螯合剂，它是另一种可引起痕量金属生物利用度降低的方法，可用于检查缺陷。每天抽取样品以监测细胞生长和活力，营养水平，β-葡萄糖醛酸苷酶活性和微量锌通量。细胞周期分析显示，在补锌的培养物中，sub-G0 / G1种类受到抑制，与对照，EDTA和铜补充的培养物相比，维持较高的生存能力。收获物中的酶活性分析表明，在补充锌的反应堆中，β-葡萄糖醛酸苷酶的比活性更高。进行补充浓度为50、100和150μM的锌的确认试验。进一步的细胞周期分析和caspase-3分析证明锌作为凋亡抑制因子的作用，负责增加补锌生物反应器中β-葡萄糖醛酸苷酶的收获纯度。细胞周期分析显示，在补锌的培养物中，sub-G0 / G1种类受到抑制，与对照，EDTA和铜补充的培养物相比，维持较高的生存能力。收获物中的酶活性分析表明，在补充锌的反应堆中，β-葡萄糖醛酸苷酶的比活性更高。进行补充浓度为50、100和150μM的锌的确认试验。进一步的细胞周期分析和caspase-3分析证明锌作为凋亡抑制因子的作用，负责增加补锌生物反应器中β-葡萄糖醛酸苷酶的收获纯度。细胞周期分析显示，在补锌的培养物中，sub-G0 / G1种类受到抑制，与对照，EDTA和铜补充的培养物相比，维持较高的生存能力。收获物中的酶活性分析表明，在补充锌的反应堆中，β-葡萄糖醛酸苷酶的比活性更高。进行补充浓度为50、100和150μM的锌的确认试验。进一步的细胞周期分析和caspase-3分析证明锌作为凋亡抑制因子的作用，负责增加补锌生物反应器中β-葡萄糖醛酸苷酶的收获纯度。收获物中的酶活性分析表明，在补充锌的反应堆中，β-葡萄糖醛酸苷酶的比活性更高。进行补充浓度为50、100和150μM的锌的确认试验。进一步的细胞周期分析和caspase-3分析证明锌作为凋亡抑制因子的作用，负责增加补锌生物反应器中β-葡萄糖醛酸苷酶的收获纯度。收获物中的酶活性分析表明，在补充锌的反应堆中，β-葡萄糖醛酸苷酶的比活性更高。进行补充浓度为50、100和150μM的锌的确认试验。进一步的细胞周期分析和caspase-3分析证明锌作为凋亡抑制因子的作用，负责增加补锌生物反应器中β-葡萄糖醛酸苷酶的收获纯度。