Colonic and intestinal epithelial cells (EC) attach to a basement membrane of laminins, fibronectin, and collagen IV. Wounding of the epithelial layer can change the types of extracellular matrix (ECM) proteins to which the EC attach. In this study, we determined the effect of culturing Caco-2 cells on different ECM proteins on the capacity of EC to produce TNF-α- or IL-1-stimulated CXCL8. The effect of the ECM proteins was such that CXCL8 secretion by cells cultured on collagen I > collagen IV > fibronectin or laminin-111. However, suppression of ROCK activity resulted in a similar 75 to 85% suppression of CXCL8 secretion regardless of the ECM protein type. This suggests that EC can produce different levels of CXCL8 depending on the type of ECM proteins they attach to, but all cases result in a similar requirement for ROCK activity for optimal CXCL8 secretion. Furthermore, when confluent cells were compared to subconfluent cells, the level of TNF- or IL-1-stimulated CXCL8 secretion was greatly elevated with the subconfluent cells and inhibiting ROCK had no effect on CXCL8 secretion levels by the confluent cells. These experiments suggest that CXCL8 responses by confluent cells, which would model for intact, unwounded epithelial, do not involve ROCK activation. However, CXCL8 responses by subconfluent cells, which would model for cells attaching to and moving on ECM proteins in wounded epithelia, require ROCK activation for greatly elevated CXCL8 responses. These results provide a model to examine the important conditions which regulate chemokine production by EC in wounded epithelia.

中文翻译：

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细胞外基质蛋白结合和培养融合状态对ROCK对结肠上皮细胞分泌TNF-α-和IL-1刺激的CXCL8的影响。

结肠和肠上皮细胞（EC）附着在层粘连蛋白，纤连蛋白和胶原IV的基底膜上。上皮层的伤口可改变EC附着的细胞外基质（ECM）蛋白的类型。在这项研究中，我们确定了在不同的ECM蛋白上培养Caco-2细胞对EC产生TNF-α-或IL-1刺激的CXCL8的能力的影响。ECM蛋白的作用是使培养在胶原蛋白I>胶原蛋白IV>纤连蛋白或层粘连蛋白111上的细胞分泌CXCL8。但是，不管ECM蛋白类型如何，ROCK活性的抑制都会导致CXCL8分泌受到类似的75-85％抑制。这表明EC可以产生不同水平的CXCL8，具体取决于它们所附着的ECM蛋白的类型，但所有情况均导致对ROCK活性具有相似的要求，以实现最佳的CXCL8分泌。此外，当将汇合细胞与亚汇合细胞进行比较时，亚汇合细胞大大提高了TNF-或IL-1刺激的CXCL8分泌水平，而ROCK对汇合细胞的CXCL8分泌水平没有影响。这些实验表明，汇合细胞的CXCL8反应将模拟完整，未受伤的上皮，但不涉及ROCK活化。但是，亚融合细胞的CXCL8响应将为附着在上皮细胞中的ECM蛋白并在其上移动的细胞建模，需要ROCK激活才能大大提高CXCL8响应。这些结果提供了一个模型，以检查重要条件来调节EC在受伤的上皮细胞中产生的趋化因子。此外，当将汇合细胞与亚汇合细胞进行比较时，亚汇合细胞大大提高了TNF-或IL-1刺激的CXCL8分泌水平，并且抑制ROCK对汇合细胞对CXCL8分泌水平没有影响。这些实验表明，汇合细胞的CXCL8反应将模拟完整，未受伤的上皮，但不涉及ROCK活化。但是，亚融合细胞的CXCL8响应将为附着在上皮细胞中的ECM蛋白并在其上移动的细胞建模，需要ROCK激活才能大大提高CXCL8响应。这些结果提供了一个模型，以检查重要条件来调节EC在受伤的上皮细胞中产生的趋化因子。此外，当将汇合细胞与亚汇合细胞进行比较时，亚汇合细胞大大提高了TNF-或IL-1刺激的CXCL8分泌水平，而ROCK对汇合细胞的CXCL8分泌水平没有影响。这些实验表明，汇合细胞的CXCL8反应将模拟完整，未受伤的上皮，但不涉及ROCK活化。但是，亚融合细胞的CXCL8响应将为附着在上皮细胞中的ECM蛋白并在其上移动的细胞建模，需要ROCK激活才能大大提高CXCL8响应。这些结果提供了一个模型，以检查调节EC在受伤的上皮中调节趋化因子产生的重要条件。TNF-α或IL-1刺激的CXCL8分泌水平随亚汇合细胞而大大提高，而抑制ROCK对汇合细胞对CXCL8分泌水平没有影响。这些实验表明，汇合细胞的CXCL8反应将模拟完整，未受伤的上皮，但不涉及ROCK活化。但是，亚融合细胞的CXCL8响应将为附着在上皮细胞中的ECM蛋白并在其上移动的细胞建模，需要ROCK激活才能大大提高CXCL8响应。这些结果提供了一个模型，以检查重要条件来调节EC在受伤的上皮细胞中产生的趋化因子。TNF-α或IL-1刺激的CXCL8分泌水平随亚汇合细胞而大大提高，而抑制ROCK对汇合细胞对CXCL8分泌水平没有影响。这些实验表明，汇合细胞的CXCL8反应将模拟完整，未受伤的上皮，但不涉及ROCK活化。但是，亚融合细胞的CXCL8响应将为附着在上皮细胞中的ECM蛋白并在其上移动的细胞建模，需要ROCK激活才能大大提高CXCL8响应。这些结果提供了一个模型，以检查重要条件来调节EC在受伤的上皮细胞中产生的趋化因子。该模型将为完整，未受伤的上皮建模，不涉及ROCK激活。但是，亚融合细胞的CXCL8响应将为附着在上皮细胞中的ECM蛋白并在其上移动的细胞建模，需要ROCK激活才能大大提高CXCL8响应。这些结果提供了一个模型，以检查重要条件来调节EC在受伤的上皮细胞中产生的趋化因子。该模型将为完整，未受伤的上皮建模，不涉及ROCK激活。但是，亚融合细胞的CXCL8响应将为附着在上皮细胞中的ECM蛋白并在其上移动的细胞建模，需要ROCK激活才能大大提高CXCL8响应。这些结果提供了一个模型，以检查重要条件来调节EC在受伤的上皮细胞中产生的趋化因子。