CDKN2A is an evolutionarily conserved gene encoding proteins implicated in tumor suppression, ocular development, aging, and metabolic diseases. Like the human form, mouse Cdkn2a encodes two distinct proteins-p16Ink4a, which blocks cyclin-dependent kinase activity, and p19Arf, which is best known as a positive regulator of the p53 tumor suppressor-and their functions have been well-studied in genetically engineered mouse models. Relatively little is known about how expression of the two transcripts is controlled in normal development and in certain disease states. To better understand their coordinate and transcript-specific expression in situ, we used a transposase-aided approach to generate a new BAC transgenic mouse model in which the first exons encoding Arf and Ink4a are replaced by fluorescent reporters. We show that mouse embryo fibroblasts generated from the transgenic lines faithfully display induction of each transgenic reporter in cell culture models, and we demonstrate the expected expression of the Arf reporter in the normal testis, one of the few places where that promoter is normally expressed. Interestingly, the TGFβ-2-dependent induction of the Arf reporter in the eye-a process essential for normal eye development-does not occur. Our findings illustrate the value of BAC transgenesis in mapping key regulatory elements in the mouse by revealing the genomic DNA required for Cdkn2a induction in cultured cells and the developing testis, and the apparent lack of elements driving expression in the developing eye.

中文翻译：

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转座酶辅助 BAC 转基因小鼠模型中睾丸特异性 Arf 启动子的表达。

CDKN2A 是一种进化上保守的基因，编码与肿瘤抑制、眼部发育、衰老和代谢疾病有关的蛋白质。与人类形式一样，小鼠 Cdkn2a 编码两种不同的蛋白质——p16Ink4a，它阻断依赖于细胞周期蛋白的激酶活性，和 p19Arf，它最著名的是 p53 肿瘤抑制因子的正调节因子——它们的功能已在基因工程中得到充分研究。鼠标模型。关于这两种转录物的表达如何在正常发育和某些疾病状态中受到控制，我们知之甚少。为了更好地了解它们的原位坐标和转录特异性表达，我们使用转座酶辅助方法来生成新的 BAC 转基因小鼠模型，其中编码 Arf 和 Ink4a 的第一个外显子被荧光报告基因取代。我们表明，从转基因系产生的小鼠胚胎成纤维细胞在细胞培养模型中忠实地显示了每个转基因报告基因的诱导，并且我们证明了 Arf 报告基因在正常睾丸中的预期表达，这是该启动子正常表达的少数几个地方之一。有趣的是，眼睛中 Arf 报告基因的 TGFβ-2 依赖性诱导（正常眼睛发育所必需的过程）不会发生。我们的研究结果通过揭示在培养细胞和发育中的睾丸中诱导 Cdkn2a 所需的基因组 DNA 以及在发育中的眼睛中明显缺乏驱动表达的元件来说明 BAC 转基因在绘制小鼠关键调控元件中的价值。我们展示了正常睾丸中 Arf 报告基因的预期表达，这是启动子正常表达的少数几个地方之一。有趣的是，眼睛中 Arf 报告基因的 TGFβ-2 依赖性诱导（正常眼睛发育所必需的过程）不会发生。我们的研究结果通过揭示在培养细胞和发育中的睾丸中诱导 Cdkn2a 所需的基因组 DNA 以及在发育中的眼睛中明显缺乏驱动表达的元件来说明 BAC 转基因在绘制小鼠关键调控元件中的价值。我们展示了正常睾丸中 Arf 报告基因的预期表达，这是启动子正常表达的少数几个地方之一。有趣的是，眼睛中 Arf 报告基因的 TGFβ-2 依赖性诱导（正常眼睛发育所必需的过程）不会发生。我们的研究结果通过揭示在培养细胞和发育中的睾丸中诱导 Cdkn2a 所需的基因组 DNA 以及在发育中的眼睛中明显缺乏驱动表达的元件来说明 BAC 转基因在绘制小鼠关键调控元件中的价值。