OBJECTIVE Rituximab is used for the treatment of Non-Hodgkin's Lymphoma (NHL). This study focuses on development of 68 Ga labeled Rituximab fragments [(68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab and 68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab] as PET imaging agents for NHL. METHODS Rituximab was digested with immobilized pepsin and papain to yield F (ab')2 and Fab fragments respectively which were characterized by SE-HPLC and SDS-PAGE. They were conjugated with p-SCN-Bn-NOTA, labeled with 68 Ga and characterized by SE-HPLC. Intact Rituximab was labeled with Gallium-68 for comparison. Specificity of 68 Ga labeled immunoconjugates was ascertained by immunoreactivity and cell binding studies in Raji cells while biodistribution studies were performed in normal Swiss mice. RESULTS Gradient SDS-PAGE under non-reducing condition showed molecular weights of F (ab')2 -Rituximab and F (ab')-Rituximab as ~100 Kd and ~40 Kd respectively. RCP of 68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab and 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab were 98.2±0.5 % and 98.8±0.2 % respectively with retention times of 17.1±0.1 min and 19.3±0.1 min in SE-HPLC. 68 Ga labeled Rituximab fragments were stable in saline and serum upto 2 h post preparation and exhibited specificity to CD20 antigen. Immunoreactivity of 68 Ga labeled immunoconjugates was >80 %. Clearance of the fragmented radioimmunoconjugates was predominantly through renal route. CONCLUSION Preliminary results from this study demonstrate the potential of 68 Ga- NOTA-F (ab')2 -Rituximab and 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab as PET imaging agents for NHL.

中文翻译：

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68 Ga-NOTA-Rituximab 片段作为非霍奇金淋巴瘤放射免疫显像剂的制备和初步生物评价研究

目的 利妥昔单抗用于治疗非霍奇金淋巴瘤 (NHL)。本研究的重点是开发 68 Ga 标记的利妥昔单抗片段 [（68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab 和 68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab] 作为 NHL 的 PET 显像剂。方法）用固定化胃蛋白酶和木瓜蛋白酶消化，分别产生 F (ab')2 和 Fab 片段，通过 SE-HPLC 和 SDS-PAGE 进行表征。它们与 p-SCN-Bn-NOTA 偶联，用 68 Ga 标记并通过 SE 表征-HPLC. 完整的 Rituximab 用 Gallium-68 标记以进行比较。68 Ga 标记的免疫偶联物的特异性通过 Raji 细胞中的免疫反应性和细胞结合研究来确定，同时在正常瑞士小鼠中进行生物分布研究。结果非还原条件下的梯度SDS-PAGE显示F(ab')2-Rituximab和F(ab')-Rituximab的分子量分别为~100Kd和~40Kd。68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab 和 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab 的 RCP 分别为 98.2±0.5 % 和 98.8±0.2 %，保留时间分别为 17.1±0.1 分钟和 19.3±在 SE-HPLC 中 0.1 分钟。68 Ga 标记的利妥昔单抗片段在盐水和血清中在制备后长达 2 小时是稳定的，并且表现出对 CD20 抗原的特异性。68 Ga 标记的免疫偶联物的免疫反应性 > 80%。碎片化放射免疫偶联物的清除主要通过肾脏途径。结论 本研究的初步结果证明了 68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab 和 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab 作为 NHL PET 显像剂的潜力。)-利妥昔单抗分别为~100 Kd 和~40 Kd。68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab 和 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab 的 RCP 分别为 98.2±0.5 % 和 98.8±0.2 %，保留时间分别为 17.1±0.1 分钟和 19.3±在 SE-HPLC 中 0.1 分钟。68 Ga 标记的利妥昔单抗片段在盐水和血清中在制备后长达 2 小时是稳定的，并且表现出对 CD20 抗原的特异性。68 Ga 标记的免疫偶联物的免疫反应性 > 80%。碎片化放射免疫偶联物的清除主要通过肾脏途径。结论 本研究的初步结果证明了 68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab 和 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab 作为 NHL PET 显像剂的潜力。)-利妥昔单抗分别为~100 Kd 和~40 Kd。68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab 和 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab 的 RCP 分别为 98.2±0.5 % 和 98.8±0.2 %，保留时间分别为 17.1±0.1 分钟和 19.3±在 SE-HPLC 中 0.1 分钟。68 Ga 标记的利妥昔单抗片段在盐水和血清中在制备后长达 2 小时是稳定的，并且表现出对 CD20 抗原的特异性。68 Ga 标记的免疫偶联物的免疫反应性 > 80%。碎片化放射免疫偶联物的清除主要通过肾脏途径。结论 本研究的初步结果证明了 68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab 和 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab 作为 NHL PET 显像剂的潜力。SE-HPLC 中保留时间分别为 2% 和 17.1±0.1 分钟和 19.3±0.1 分钟。68 Ga 标记的利妥昔单抗片段在盐水和血清中在制备后长达 2 小时是稳定的，并且表现出对 CD20 抗原的特异性。68 Ga 标记的免疫偶联物的免疫反应性 > 80%。碎片化放射免疫偶联物的清除主要通过肾脏途径。结论 本研究的初步结果证明了 68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab 和 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab 作为 NHL PET 显像剂的潜力。SE-HPLC 中保留时间分别为 2% 和 17.1±0.1 分钟和 19.3±0.1 分钟。68 Ga 标记的利妥昔单抗片段在盐水和血清中在制备后长达 2 小时是稳定的，并且表现出对 CD20 抗原的特异性。68 Ga 标记的免疫偶联物的免疫反应性 > 80%。碎片化放射免疫偶联物的清除主要通过肾脏途径。结论 本研究的初步结果证明了 68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab 和 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab 作为 NHL PET 显像剂的潜力。碎片化放射免疫偶联物的清除主要通过肾脏途径。结论 本研究的初步结果证明了 68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab 和 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab 作为 NHL PET 显像剂的潜力。碎片化放射免疫偶联物的清除主要通过肾脏途径。结论 本研究的初步结果证明了 68 Ga-NOTA-F (ab')2 -Rituximab 和 68 Ga-NOTA-F (ab')-Rituximab 作为 NHL PET 显像剂的潜力。