Abstract Histological evaluation is a complex, multistep process culminating in tissue staining. All of the steps leading up to the staining affect the final quality, but too often the effects of these preparations are not given enough consideration. Fixatives in particular usually are chosen not for efficacy but for convenience and availability. This study attempts to create guidelines for selecting fixatives for bone tissue histological evaluation. We compared two of the most widely used fixatives, ethanol and formalin, in their use on mouse tibias embedded in methylmethacrylate and subsequently stained with toluidine blue, safranin O, or Von Kossa. Our results show that ethanol fixation (70%) and subsequent processing in methylmethacrylate gives better staining results for bone cell related elements than fixing in 10% neutral buffered formalin with the same processing and embedding techniques. Further we demonstrated than an additional acetone dehydration and clearing step allowed for even better visualization in bone specimens fixed with 70% ethanol. However, the additional acetone step did not enhance visualization in bone specimens fixed with 10% neutral buffered formalin. Finally, marrow elements were more easily visualized when fixed with formalin as opposed to ethanol. (The J Histotechnol 32(1):27–31, 2009) Submitted September 23, 2008; accepted with revisions January 24, 2009

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固定和脱水对甲基丙烯酸甲酯包埋未脱钙鼠骨标本组织学质量的影响

摘要 组织学评估是一个复杂的、多步骤的过程，最终以组织染色结束。导致染色的所有步骤都会影响最终质量，但这些准备工作的影响往往没有得到足够的考虑。特别是固定剂的选择通常不是为了功效，而是为了方便和可用性。本研究试图为选择用于骨组织组织学评估的固定剂制定指南。我们比较了两种最广泛使用的固定剂，乙醇和福尔马林，它们用于嵌入甲基丙烯酸甲酯的小鼠胫骨，随后用甲苯胺蓝、番红 O 或 Von Kossa 染色。我们的结果表明，与在 10% 中性缓冲福尔马林中使用相同的处理和包埋技术固定相比，乙醇固定 (70%) 和随后在甲基丙烯酸甲酯中的处理对骨细胞相关元素提供了更好的染色结果。我们进一步证明，额外的丙酮脱水和清除步骤可以在用 70% 乙醇固定的骨骼标本中实现更好的可视化。然而，额外的丙酮步骤并没有增强用 10% 中性缓冲福尔马林固定的骨标本的可视化。最后，与乙醇相比，当用福尔马林固定时，骨髓元素更容易被观察到。（The J Histotechnol 32(1):27–31, 2009）2008 年 9 月 23 日提交；2009 年 1 月 24 日修订后接受 我们进一步证明，额外的丙酮脱水和清除步骤可以在用 70% 乙醇固定的骨骼标本中实现更好的可视化。然而，额外的丙酮步骤并没有增强用 10% 中性缓冲福尔马林固定的骨标本的可视化。最后，与乙醇相比，当用福尔马林固定时，骨髓元素更容易被观察到。（The J Histotechnol 32(1):27–31, 2009）2008 年 9 月 23 日提交；2009 年 1 月 24 日修订后接受 我们进一步证明，额外的丙酮脱水和清除步骤可以在用 70% 乙醇固定的骨骼标本中实现更好的可视化。然而，额外的丙酮步骤并没有增强用 10% 中性缓冲福尔马林固定的骨标本的可视化。最后，与乙醇相比，当用福尔马林固定时，骨髓元素更容易被观察到。（The J Histotechnol 32(1):27–31, 2009）2008 年 9 月 23 日提交；2009 年 1 月 24 日修订后接受 2009) 2008 年 9 月 23 日提交；2009 年 1 月 24 日修订后接受 2009) 2008 年 9 月 23 日提交；2009 年 1 月 24 日修订后接受