Well-preserved bivalve adult forms are generally easily recognizable, but planktonic or damaged samples (crushed organisms in sediments or digested bivalves in predator guts) are far more difficult to identify. 3,18 Molecular approaches may overcome some of these problems. In this paper, we report new PCR-based tests for the identification of three bivalve species within the Myoidae order: Mya arenaria, Mya truncata, and Hiatella arctica based on the internal transcribed spacer (ITS-1) ribosomal DNA region located between the 18S and 5.8S ribosomal RNA genes. Marine bivalves were collected between 1998 and 2000 on the East and West coasts of Scotland, and identified by morphology. Individuals from the following species, which are taxonomically close and commonly found on the coasts of UK, were used in this study: Cerastoderma edule (Linnaeus, 1758), Dosinia exoleta (Linnaeus, 1758), Hiatella arctica (Linnaeus, 1767), Mya arenaria Linnaeus, 1758, Mya truncata Linnaeus, 1758, Mytilus edulis (Linnaeus, 1758), and Venerupis senegalensis (Gmelin, 1791). DNA was extracted from whole Hiatella arctica specimens, whereas for bigger bivalves, such as the Mya species, Cerastoderma edule, Dosinia exoleta, and Venerupis senegalensis, we have used only some parts of the animal (foot or gills). Tissues were digested and DNA was extracted by using a DNeasy Tissue kit (QIAGEN Ltd, Crawley, UK) using the protocol recommended by the manufacturer. Purified DNA samples were stored at ‐ 20°C until needed. A PCR reaction (using previously published ITS2 and ITS5 primers 20 ) was performed on different bivalve species. Unfortunately, bands of 550 bp were amplified from DNA extracted for all the species tested in this study even when the Tm was raised to 56°C instead of 48°C, as recommended 20 (data not shown) and, therefore, could not be used to specifically identify Mya species according to the size of the amplified DNA. Since only a few sequences have been published for these organisms and none are so far in the GenBank for Mya species, we sequenced amplified products from two different Mya species and representatives of Hiatella arctica. DNA fragments were excised from ethidium bromidestained agarose gels using the QIAquick gel extraction kit (QIAGEN Ltd, Crawley, UK) and were sequenced on an ABI 310 DNA sequencer from Applied Biosystems (Warrington, UK) using the Big Dye Terminator kit. Sequences were aligned using the MultiAlin software. 19 Sequences can be retrieved on

中文翻译：

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双壳类动物 Mya arenaria、Mya truncata 和 Hiatella arctica 的分子特征

保存完好的双壳类成体通常很容易识别，但浮游或损坏的样本（沉积物中压碎的生物体或捕食者肠道中消化的双壳类动物）则更难识别。3,18 分子方法可能会克服其中的一些问题。在本文中，我们报告了新的基于 PCR 的测试，用于鉴定 Myoidae 目内的三种双壳类物种：Mya arenaria、Mya truncata 和 Hiatella arctica，基于位于 18S 之间的内部转录间隔区 (ITS-1) 核糖体 DNA 区域。和 5.8S 核糖体 RNA 基因。1998 年至 2000 年间在苏格兰东海岸和西海岸收集了海洋双壳类动物，并通过形态学进行了鉴定。本研究使用了以下物种的个体，这些物种在分类学上很接近并且常见于英国海岸：Cerastoderma edule (Linnaeus, 1758)、Dosinia exoleta (Linnaeus, 1758)、Hiatella arctica (Linnaeus, 1767)、Mya arenaria Linnaeus, 1758、Mya truncata Linnaeus, 1758、Mytilus edulis (Linnaeus, 1767), 1758 和 17GV 。DNA 是从整个 Hiatella arctica 标本中提取的，而对于较大的双壳类动物，例如 Mya 种、Cerastoderma edule、Dosinia exoleta 和 Venerupis senegalensis，我们只使用了动物的某些部位（脚或鳃）。使用 DNeasy Tissue 试剂盒 (QIAGEN Ltd, Crawley, UK) 使用制造商推荐的方案消化组织并提取 DNA。纯化的 DNA 样品在 20°C 下储存直至需要。对不同的双壳类物种进行 PCR 反应（使用先前公布的 ITS2 和 ITS5 引物 20）。很遗憾，即使 Tm 升高到 56°C 而不是 48°C，如推荐的 20（数据未显示），从本研究中测试的所有物种提取的 DNA 中扩增了 550 bp 的条带，因此不能用于根据扩增 DNA 的大小专门识别 Mya 物种。由于这些生物体只发表了少数序列，而目前为止没有一个序列出现在 Mya 物种的 GenBank 中，我们对来自两种不同的 Mya 物种和 Hiatella arctica 代表的扩增产物进行了测序。使用 QIAquick 凝胶提取试剂盒 (QIAGEN Ltd, Crawley, UK) 从溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶上切下 DNA 片段，并使用 Big Dye Terminator 试剂盒在 Applied Biosystems (Warrington, UK) 的 ABI 310 DNA 测序仪上测序。使用 MultiAlin 软件比对序列。可以检索 19 个序列 如推荐的 20（数据未显示），因此不能用于根据扩增 DNA 的大小专门识别 Mya 物种。由于这些生物体只发表了少数序列，而目前为止没有一个序列出现在 Mya 物种的 GenBank 中，我们对来自两种不同 Mya 物种和 Hiatella arctica 代表的扩增产物进行了测序。使用 QIAquick 凝胶提取试剂盒 (QIAGEN Ltd, Crawley, UK) 从溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶上切下 DNA 片段，并使用 Big Dye Terminator 试剂盒在 Applied Biosystems (Warrington, UK) 的 ABI 310 DNA 测序仪上测序。使用 MultiAlin 软件比对序列。可以检索 19 个序列 如推荐的 20（数据未显示），因此不能用于根据扩增 DNA 的大小专门识别 Mya 物种。由于这些生物体只发表了少数序列，而目前为止没有一个序列出现在 Mya 物种的 GenBank 中，我们对来自两种不同 Mya 物种和 Hiatella arctica 代表的扩增产物进行了测序。使用 QIAquick 凝胶提取试剂盒 (QIAGEN Ltd, Crawley, UK) 从溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶上切下 DNA 片段，并使用 Big Dye Terminator 试剂盒在 Applied Biosystems (Warrington, UK) 的 ABI 310 DNA 测序仪上测序。使用 MultiAlin 软件比对序列。可以检索 19 个序列 由于这些生物体只发表了少数序列，而目前为止没有一个序列出现在 Mya 物种的 GenBank 中，我们对来自两种不同 Mya 物种和 Hiatella arctica 代表的扩增产物进行了测序。使用 QIAquick 凝胶提取试剂盒 (QIAGEN Ltd, Crawley, UK) 从溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶上切下 DNA 片段，并使用 Big Dye Terminator 试剂盒在 Applied Biosystems (Warrington, UK) 的 ABI 310 DNA 测序仪上测序。使用 MultiAlin 软件比对序列。可以检索 19 个序列 由于这些生物体只发表了少数序列，而目前为止没有一个序列出现在 Mya 物种的 GenBank 中，我们对来自两种不同 Mya 物种和 Hiatella arctica 代表的扩增产物进行了测序。使用 QIAquick 凝胶提取试剂盒 (QIAGEN Ltd, Crawley, UK) 从溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶上切下 DNA 片段，并使用 Big Dye Terminator 试剂盒在 Applied Biosystems (Warrington, UK) 的 ABI 310 DNA 测序仪上测序。使用 MultiAlin 软件比对序列。可以检索 19 个序列 使用 QIAquick 凝胶提取试剂盒 (QIAGEN Ltd, Crawley, UK) 从溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶上切下 DNA 片段，并使用 Big Dye Terminator 试剂盒在 Applied Biosystems (Warrington, UK) 的 ABI 310 DNA 测序仪上测序。使用 MultiAlin 软件比对序列。可以检索 19 个序列 使用 QIAquick 凝胶提取试剂盒 (QIAGEN Ltd, Crawley, UK) 从溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶上切下 DNA 片段，并使用 Big Dye Terminator 试剂盒在 Applied Biosystems (Warrington, UK) 的 ABI 310 DNA 测序仪上测序。使用 MultiAlin 软件比对序列。可以检索 19 个序列