An original RNA-seq mapping strategy, validated with chromosome engineering and physical mapping, identifies candidate genes for fertility restoration in the 6HchS chromosome of Hordeum chilense in the wheat msH1 system. Cytoplasmic male sterility (CMS) is a valuable trait for hybrid seed production. The msH1 CMS system in common wheat results from the incompatibility between the nuclear genome of wheat and the cytoplasm of the wild barley Hordeum chilense. This work aims to identify H. chilense candidate genes for fertility restoration in the msH1 system with a multidisciplinary strategy based on chromosome engineering, differential expression analysis and genome mapping. Alloplasmic isogenic wheat lines differing for fertility, associated with the presence of an acrocentric chromosome Hchac resulting from the rearrangement of the short arms of H. chilense chromosomes 1Hch and 6Hch, were used for transcriptome sequencing. Two novel RNA-seq mapping approaches were designed and compared to identify differentially expressed genes of H. chilense associated with male fertility restoration. Minichromosomes (Hchmi), new smaller reorganizations of the Hchac also restoring fertility, were obtained and used to validate the candidate genes. This strategy was successful identifying a putative restorer-of-fertility region on 6HchS, with six candidate genes, including the ortholog of the barley restorer gene Rfm1. Additionally, transcriptomics gave preliminary insights on sterility and restoration networks showing the importance of energy supply, stress, protein metabolism and RNA processing.

中文翻译：

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转录组学、染色体工程和作图确定了 CMS 小麦系统 msH1 中的生育力恢复区。

通过染色体工程和物理作图验证的原始 RNA-seq 作图策略确定了小麦 msH1 系统中大麦 6HchS 染色体中生育力恢复的候选基因。细胞质雄性不育（CMS）是杂交种子生产的宝贵性状。普通小麦中的 msH1 CMS 系统是由小麦的核基因组与野生大麦 Hordeum chilense 的细胞质不相容造成的。本工作旨在通过基于染色体工程、差异表达分析和基因组作图的多学科策略，在 msH1 系统中鉴定用于恢复生育能力的 H. chilense 候选基因。异质同基因小麦品系的生育力不同，与由 H. chilense 染色体 1Hch 和 6Hch 用于转录组测序。设计并比较了两种新的 RNA-seq 作图方法，以鉴定与雄性生育力恢复相关的 H. chilense 差异表达基因。获得了微型染色体 (Hchmi)，即 Hchac 的新的较小重组，也恢复了生育能力，并用于验证候选基因。该策略成功地鉴定了 6HchS 上假定的生育力恢复区，具有六个候选基因，包括大麦恢复基因 Rfm1 的直系同源物。此外，转录组学对不育和恢复网络提供了初步见解，显示了能量供应、压力、蛋白质代谢和 RNA 加工的重要性。设计并比较了两种新的 RNA-seq 作图方法，以鉴定与雄性生育力恢复相关的 H. chilense 差异表达基因。获得了微型染色体 (Hchmi)，即 Hchac 的新的较小重组，也恢复了生育能力，并用于验证候选基因。该策略成功地鉴定了 6HchS 上假定的生育力恢复区，具有六个候选基因，包括大麦恢复基因 Rfm1 的直系同源物。此外，转录组学对不育和恢复网络提供了初步见解，显示了能量供应、压力、蛋白质代谢和 RNA 加工的重要性。设计并比较了两种新的 RNA-seq 作图方法，以鉴定与雄性生育力恢复相关的 H. chilense 差异表达基因。获得了微型染色体 (Hchmi)，即 Hchac 的新的较小重组，也恢复了生育能力，并用于验证候选基因。该策略成功地鉴定了 6HchS 上假定的生育力恢复区，具有六个候选基因，包括大麦恢复基因 Rfm1 的直系同源物。此外，转录组学对不育和恢复网络提供了初步见解，显示了能量供应、压力、蛋白质代谢和 RNA 加工的重要性。Hchac 的新的较小重组也恢复了生育能力，并用于验证候选基因。该策略成功地鉴定了 6HchS 上假定的生育力恢复区，具有六个候选基因，包括大麦恢复基因 Rfm1 的直系同源物。此外，转录组学对不育和恢复网络提供了初步见解，显示了能量供应、压力、蛋白质代谢和 RNA 加工的重要性。Hchac 的新的较小重组也恢复了生育能力，并用于验证候选基因。该策略成功地鉴定了 6HchS 上假定的生育力恢复区，具有六个候选基因，包括大麦恢复基因 Rfm1 的直系同源物。此外，转录组学对不育和恢复网络提供了初步见解，显示了能量供应、压力、蛋白质代谢和 RNA 加工的重要性。