Human platelet lysate (HPL) is a promising alternative to fetal calf serum (FCS) for the expansion of adipose tissue mesenchymal stromal cells (AT-MSCs) for translational medicine applications. However, some biological effects of HPL are still to be elucidated. We aimed to compare complex characteristics, such as cell morphology, proliferative activity, differentiation potential, and especially monolayer recovery, DNA integrity, and the gene expression pattern, between AT-MSCs cultured with HPL or FCS. Primary AT-MSC cultures were expanded in medium containing FCS or pooled HPL. Cell growth and proliferation were estimated by cell doubling time and the monolayer formation rate, while migration was assessed by wound-healing assay. The capacity for adipogenic and osteogenic differentiation was evaluated by alkaline phosphatase and Oil Red O staining. DNA integrity was evaluated by comet assay, and analysis of gene expression by real-time PCR. Media supplemented with HPL or FCS provided a similar surface immunophenotype, cell morphology (except some cell dimensions and a bigger colony size in HPL), DNA integrity, and rate of wound healing. Meanwhile, AT-MSC proliferated more intensively in HPL-supplemented media (especially at 5% HPL) and had a reduced doubling population time. AT-MSC in HPL had increased adipogenic potential and similar osteogenic potential in comparison with FCS. Our results indicate the feasibility and evident prospects for the use of pooled HPL as an alternative to FCS and safe non-xenogenic growth supplement for ex vivo expansion of clinical-grade AT-MSCs for regenerative medicine purposes.

中文翻译：

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人血小板裂解物维持脂肪来源的间充质基质细胞的成骨/成脂分化潜能，并在体外维持其 DNA 完整性

人血小板裂解物 (HPL) 是胎牛血清 (FCS) 的一种有前景的替代品，可用于脂肪组织间充质基质细胞 (AT-MSC) 的扩增，用于转化医学应用。然而，HPL的一些生物学效应仍有待阐明。我们旨在比较用 HPL 或 FCS 培养的 AT-MSC 之间的复杂特征，例如细胞形态、增殖活性、分化潜能，尤其是单层恢复、DNA 完整性和基因表达模式。原代 AT-MSC 培养物在含有 FCS 或混合 HPL 的培养基中扩增。通过细胞倍增时间和单层形成率评估细胞生长和增殖，而通过伤口愈合试验评估迁移。通过碱性磷酸酶和油红 O 染色评估成脂和成骨分化的能力。DNA完整性通过彗星试验进行评估，并通过实时PCR分析基因表达。补充有 HPL 或 FCS 的培养基提供了相似的表面免疫表型、细胞形态（除了一些细胞尺寸和 HPL 中更大的菌落大小）、DNA 完整性和伤口愈合率。同时，AT-MSC 在补充 HPL 的培养基中增殖更密集（尤其是在 5% HPL 时），并且倍增时间缩短。与 FCS 相比，HPL 中的 AT-MSC 具有增加的脂肪生成潜力和相似的成骨潜力。我们的结果表明，使用混合 HPL 作为 FCS 的替代品和安全的非异种生长补充剂的可行性和明显的前景，用于临床级 AT-MSC 的体外扩增，用于再生医学目的。通过实时 PCR 分析基因表达。补充有 HPL 或 FCS 的培养基提供了相似的表面免疫表型、细胞形态（除了一些细胞尺寸和 HPL 中更大的菌落大小）、DNA 完整性和伤口愈合率。同时，AT-MSC 在补充 HPL 的培养基中增殖更密集（尤其是在 5% HPL 时），并且倍增时间缩短。与 FCS 相比，HPL 中的 AT-MSC 具有增加的脂肪生成潜力和相似的成骨潜力。我们的结果表明，使用混合 HPL 作为 FCS 的替代品和安全的非异种生长补充剂的可行性和明显的前景，用于临床级 AT-MSC 的体外扩增，用于再生医学目的。通过实时 PCR 分析基因表达。补充有 HPL 或 FCS 的培养基提供了相似的表面免疫表型、细胞形态（除了一些细胞尺寸和 HPL 中更大的菌落大小）、DNA 完整性和伤口愈合率。同时，AT-MSC 在补充 HPL 的培养基中增殖更密集（尤其是在 5% HPL 时），并且倍增时间缩短。与 FCS 相比，HPL 中的 AT-MSC 具有增加的脂肪生成潜力和相似的成骨潜力。我们的结果表明，使用混合 HPL 作为 FCS 的替代品和安全的非异种生长补充剂的可行性和明显的前景，用于临床级 AT-MSC 的体外扩增，用于再生医学目的。细胞形态（除了一些细胞尺寸和 HPL 中更大的集落大小）、DNA 完整性和伤口愈合率。同时，AT-MSC 在补充 HPL 的培养基中增殖更密集（尤其是在 5% HPL 时），并且倍增时间缩短。与 FCS 相比，HPL 中的 AT-MSC 具有增加的脂肪生成潜力和相似的成骨潜力。我们的结果表明，使用混合 HPL 作为 FCS 的替代品和安全的非异种生长补充剂的可行性和明显的前景，用于临床级 AT-MSC 的体外扩增，用于再生医学目的。细胞形态（除了一些细胞尺寸和 HPL 中更大的集落大小）、DNA 完整性和伤口愈合率。同时，AT-MSC 在补充 HPL 的培养基中增殖更密集（尤其是在 5% HPL 时），并且倍增时间缩短。与 FCS 相比，HPL 中的 AT-MSC 具有增加的脂肪生成潜力和相似的成骨潜力。我们的结果表明，使用混合 HPL 作为 FCS 的替代品和安全的非异种生长补充剂的可行性和明显的前景，用于临床级 AT-MSC 的体外扩增，用于再生医学目的。与 FCS 相比，HPL 中的 AT-MSC 具有增加的脂肪生成潜力和相似的成骨潜力。我们的结果表明，使用混合 HPL 作为 FCS 的替代品和安全的非异种生长补充剂的可行性和明显的前景，用于临床级 AT-MSC 的体外扩增，用于再生医学目的。与 FCS 相比，HPL 中的 AT-MSC 具有增加的脂肪生成潜力和相似的成骨潜力。我们的结果表明，使用混合 HPL 作为 FCS 的替代品和安全的非异种生长补充剂的可行性和明显的前景，用于临床级 AT-MSC 的体外扩增，用于再生医学目的。