We evaluated whether the origins of crude drugs derived from arthropods and annelids could be identified using molecular biological techniques. DNA was extracted from 20 crude drugs prepared from different animals using a commercial kit with added phenol treatment. The target regions used to identify origin were the mitochondrial 16S ribosomal RNA (rRNA), 12S rRNA, and cytochrome oxidase subunit I (COI) gene regions. Extracted DNA was amplified by polymerase chain reaction, and then sequenced by the Sanger method. The aligned sequences were compared with all available sequences using BLAST to estimate the origins of the crude drugs. The origin of crude drugs used in this study could be estimated using this method. The COI region was the best for identifying origin among three regions examined, based on the success rate of PCR amplification and analysis. Moreover, the 12S rRNA region was also useful for origin identification, with the exception of the earthworm. However, the origin of some crude drugs could not be strictly identified due to matches to various species in all three regions. One likely cause was that the species of origin of a crude drug has not been registered in DNA databases. We found that even the same crude drug from the same pharmaceutical company had different origins by production lot or import source country. Therefore, this method is useful not only for DNA-based origin identification but also quality control of production lots.

中文翻译：

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利用分子生物学技术鉴定节肢动物和肢体动物的粗制药物的来源。

我们评估了是否可以使用分子生物学技术鉴定源自节肢动物和肢体动物的粗制药物的来源。使用添加了苯酚处理的商业试剂盒，从从不同动物制备的20种粗制药物中提取DNA。用于鉴定来源的目标区域是线粒体16S核糖体RNA（rRNA），12S rRNA和细胞色素氧化酶亚基I（COI）基因区域。提取的DNA通过聚合酶链反应扩增，然后通过Sanger法测序。使用BLAST将比对的序列与所有可用序列进行比较，以估计粗药物的来源。可以使用这种方法估算本研究中使用的粗药物的来源。在三个被检查区域中，COI区域最适合识别来源，基于PCR扩增和分析的成功率。此外，除worm外，12S rRNA区域也可用于来源鉴定。但是，由于在这三个地区都与各种物种相匹配，因此无法严格确定某些粗制药物的来源。一个可能的原因是，未加工药物的来源物种尚未在DNA数据库中注册。我们发现，即使是同一制药公司生产的同一原料药，其生产批次或进口来源国的来源也不同。因此，该方法不仅可用于基于DNA的来源识别，而且可用于生产批次的质量控制。由于这三个地区的各种物种相匹配，因此无法严格识别某些原料药的来源。一个可能的原因是，未加工药物的来源物种尚未在DNA数据库中注册。我们发现，即使是同一制药公司生产的同一原料药，其生产批次或进口来源国的来源也不同。因此，该方法不仅可用于基于DNA的来源识别，而且可用于生产批次的质量控制。由于这三个地区的各种物种相匹配，因此无法严格识别某些原料药的来源。一个可能的原因是，未加工药物的来源物种尚未在DNA数据库中注册。我们发现，即使是同一制药公司生产的同一原料药，其生产批次或进口来源国的来源也不同。因此，该方法不仅可用于基于DNA的来源识别，而且可用于生产批次的质量控制。