In our recent studies, we identified compound N-benzyl-2-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)propanamide (AS-1) as a broad-spectrum hybrid anticonvulsant which showed potent protection across the most important animal acute seizure models such as the maximal electroshock (MES) test, the subcutaneous pentylenetetrazole (s.c. PTZ) test, and the 6-Hz (32 mA) test in mice. Therefore, AS-1 may be recognized as a candidate for new anticonvulsant effective in different types of human epilepsy with a favorable safety margin profile determined in the rotarod test in mice. In the aim of further pharmacological evaluation of AS-1, in the current study, we examined its activity in the 6-Hz (44 mA) test, which is known as the model of drug-resistant epilepsy. Furthermore, we determined also the antiseizure activity in the kindling model of epilepsy induced by repeated injection of pentylenetetrazole (PTZ) in mice. As a result, AS-1 revealed relatively potent protection in the 6-Hz (44 mA) test, as well as delayed the progression of kindling induced by repeated injection of PTZ in mice at doses of 15 mg/kg, 30 mg/kg, and 60 mg/kg. Importantly, the isobolographic analysis showed that a combination of AS-1 and valproic acid (VPA) at the fixed ratio of 1:1 displayed a supra-additive (synergistic) interaction against PTZ-induced seizures in mice. Thus, AS-1 may be potentially used in an add-on therapy with VPA. Moreover, incubation of zebrafish larvae with AS-1 substantially decreased the number, cumulative but not the mean duration of epileptiform-like events in electroencephalographic assay. Finally, the in vitro ADME-Tox studies revealed that AS-1 is characterized by a very good permeability in the parallel artificial membrane permeability assay test, excellent metabolic stability on human liver microsomes (HLMs), no significant influence on CYP3A4/CYP2D6 activity, and moderate inhibition of CYP2C9 in a concentration of 10 μM, as well as no hepatotoxic properties in HepG2 cells (concentration of 10 μM).

中文翻译：

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具有混合结构的 N-Benzyl-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)propanamide (AS-1) 作为广谱抗癫痫药物的候选者。

在我们最近的研究中，我们确定了化合物N-benzyl-2-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)propanamide (AS-1) 作为一种广谱混合抗惊厥药，在最大电休克 (MES) 测试等最重要的动物急性癫痫发作模型中显示出有效的保护作用、皮下戊四唑 (sc PTZ) 试验和小鼠 6-Hz (32 mA) 试验。因此，AS-1 可能被认为是对不同类型的人类癫痫有效的新型抗惊厥药的候选药物，在小鼠的旋转棒试验中确定了良好的安全范围。为了进一步对 AS-1 进行药理学评估，在当前的研究中，我们检查了它在 6-Hz (44 mA) 测试中的活性，该测试被称为耐药性癫痫模型。此外，我们还确定了小鼠反复注射戊四唑 (PTZ) 诱导的癫痫点燃模型中的抗癫痫活性。结果，AS-1 在 6-Hz (44 mA) 测试中显示出相对有效的保护作用，并延迟了在小鼠中重复注射 15 mg/kg、30 mg/kg 剂量的 PTZ 诱导的点燃进展, 和 60 毫克/公斤。重要的是，等效线图分析表明，AS-1 和丙戊酸 (VPA) 以 1:1 的固定比例组合对 PTZ 诱导的小鼠癫痫发作具有超加性（协同）相互作用。因此，AS-1 可能潜在地用于 VPA 的附加治疗。此外，斑马鱼幼虫与 AS-1 的孵化大大减少了脑电图分析中癫痫样事件的数量、累积但不是平均持续时间。最后，以及延迟在小鼠中重复注射 15 mg/kg、30 mg/kg 和 60 mg/kg 剂量的 PTZ 引起的点燃的进展。重要的是，等效线图分析表明，AS-1 和丙戊酸 (VPA) 以 1:1 的固定比例组合对 PTZ 诱导的小鼠癫痫发作具有超加性（协同）相互作用。因此，AS-1 可能潜在地用于 VPA 的附加治疗。此外，斑马鱼幼虫与 AS-1 的孵化大大减少了脑电图分析中癫痫样事件的数量、累积但不是平均持续时间。最后，以及延迟在小鼠中重复注射 15 mg/kg、30 mg/kg 和 60 mg/kg 剂量的 PTZ 引起的点燃的进展。重要的是，等效线图分析表明，AS-1 和丙戊酸 (VPA) 以 1:1 的固定比例组合对 PTZ 诱导的小鼠癫痫发作具有超加性（协同）相互作用。因此，AS-1 可能潜在地用于 VPA 的附加治疗。此外，斑马鱼幼虫与 AS-1 的孵化大大减少了脑电图分析中癫痫样事件的数量、累积但不是平均持续时间。最后，图1显示了对PTZ诱导的小鼠癫痫发作的超加性（协同）相互作用。因此，AS-1 可能潜在地用于 VPA 的附加治疗。此外，斑马鱼幼虫与 AS-1 的孵化大大减少了脑电图分析中癫痫样事件的数量、累积但不是平均持续时间。最后，图1显示了对PTZ诱导的小鼠癫痫发作的超加性（协同）相互作用。因此，AS-1 可能潜在地用于 VPA 的附加治疗。此外，斑马鱼幼虫与 AS-1 的孵化大大减少了脑电图分析中癫痫样事件的数量、累积但不是平均持续时间。最后，体外ADME-Tox 研究表明，AS-1 的特点是在平行人工膜通透性试验中具有非常好的通透性，对人肝微粒体 (HLM) 具有出色的代谢稳定性，对 CYP3A4/CYP2D6 活性没有显着影响，并且具有适度的抑制作用CYP2C9 浓度为 10 μM，并且在 HepG2 细胞中没有肝毒性（浓度为 10 μM）。