BACKGROUND The phosphoenolpyruvate (PEP):lactose phosphotransferase system of Staphylococcus aureus transports and phosphorylates lactose and various phenylgalactosides. Their phosphorylation is catalyzed by the Cys476-phosphorylated EIIB domain of the lactose-specific permease enzyme IICB (EIICBLac). Phosphorylation causes the release of galactosides bound to the EIIC domain into the cytoplasm by a mechanism not yet understood. RESULTS Irradiation of a reaction mixture containing the photoactivatable p-azidophenyl-β-D-galactopyranoside and EIICBLac with UV light caused a loss of EIICBLac activity. Nevertheless, photoinactivated EIICBLac could still be phosphorylated with [32P]PEP. Proteolysis of photoinactivated [32P]P-EIICBLac with subtilisin provided an 11-kDa radioactive peptide. Only the sequence of its first three amino acids (-H-G-P-, position 245-247) could be determined. They are part of the substrate binding pocket in EIICs of the lactose/cellobiose PTS family. Surprisingly, while acid treatment caused hydrolysis of the phosphoryl group in active [32P]P∼EIICBLac, photoinactivated [32P]P-EIICBLac remained strongly phosphorylated. CONCLUSION Phosphorylation of the -OH group at C6 of p-nitrenephenyl-β-D-galactopyranoside covalently bound to EIICLac by the histidyl-phosphorylated [32P]P∼EIIBLac domain is a likely explanation for the observed acid resistance. Placing p-nitrenephenyl-β-D-galactopyranoside into the active site of modelled EIICLac suggested that the nitrene binds to the -NH- group of Ser248, which would explain why no sequence data beyond Pro247could be obtained.

中文翻译：

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用对叠氮基苯基-β-D-半乳糖苷对金黄色葡萄球菌乳糖特异性EIICB磷酸转移酶组分的光灭活和共价结合的底物的磷酸化。

背景技术金黄色葡萄球菌的磷酸烯醇丙酮酸（PEP）：乳糖磷酸转移酶系统运输和磷酸化乳糖和各种苯基半乳糖苷。乳糖特异性通透酶IICB（EIICBLac）的Cys476磷酸化EIIB结构域催化它们的磷酸化。磷酸化通过一种尚不了解的机制引起与EIIC结构域结合的半乳糖苷释放到细胞质中。结果用紫外光照射包含可光活化的对叠氮基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷和EIICBLac的反应混合物会导致EIICBLac活性降低。尽管如此，光灭活的EIICBLac仍可以被[32P] PEP磷酸化。用枯草杆菌蛋白酶对光灭活的[32P] P-EIICBLac进行蛋白水解可提供11 kDa的放射性肽。仅其前三个氨基酸（-HGP-，位置245-247）。它们是乳糖/纤维二糖PTS系列的EIIC中底物结合口袋的一部分。令人惊奇的是，尽管酸处理引起活性的[32P] P-EIICBLac中的磷酰基水解，但是光灭活的[32P] P-EIICBLac仍然被强烈磷酸化。结论通过组氨酸磷酸化的[32P] P〜EIIBLac结构域与EIICLac共价结合的对-亚硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷的C6处-OH基团的磷酸化可能是观察到的耐酸性的原因。将对硝基苯苯基-β-D-吡喃半乳糖苷放入模拟的EIICLac的活性位点表明，亚硝基与Ser248的-NH-结合，这可以解释为什么无法获得Pro247以外的序列数据。它们是乳糖/纤维二糖PTS系列的EIIC中底物结合口袋的一部分。令人惊奇的是，尽管酸处理引起活性的[32P] P-EIICBLac中的磷酰基水解，但是光灭活的[32P] P-EIICBLac仍然被强烈磷酸化。结论通过组氨酸磷酸化的[32P] P-EIIBLac结构域与EIICLac共价结合的对-亚硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷的C6处-OH基团的磷酸化可能是观察到的耐酸性的原因。将对硝基苯苯基-β-D-吡喃半乳糖苷放入模拟的EIICLac的活性位点表明，亚硝基与Ser248的-NH-结合，这可以解释为什么无法获得Pro247以外的序列数据。它们是乳糖/纤维二糖PTS系列的EIIC中底物结合口袋的一部分。令人惊奇的是，尽管酸处理引起活性的[32P] P-EIICBLac中的磷酰基水解，但是光灭活的[32P] P-EIICBLac仍然被强烈磷酸化。结论通过组氨酸磷酸化的[32P] P-EIIBLac结构域与EIICLac共价结合的对-亚硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷的C6处-OH基团的磷酸化可能是观察到的耐酸性的原因。将对硝基苯苯基-β-D-吡喃半乳糖苷放入模拟的EIICLac的活性位点表明，亚硝基与Ser248的-NH-结合，这可以解释为什么无法获得Pro247以外的序列数据。光灭活的[32P] P-EIICBLac仍然被强烈磷酸化。结论通过组氨酸磷酸化的[32P] P-EIIBLac结构域与EIICLac共价结合的对-亚硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷的C6处-OH基团的磷酸化可能是观察到的耐酸性的原因。将对硝基苯苯基-β-D-吡喃半乳糖苷放入模拟的EIICLac的活性位点表明，亚硝基与Ser248的-NH-结合，这可以解释为什么无法获得Pro247以外的序列数据。光灭活的[32P] P-EIICBLac仍然被强烈磷酸化。结论通过组氨酸磷酸化的[32P] P-EIIBLac结构域与EIICLac共价结合的对-亚硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷的C6处-OH基团的磷酸化可能是观察到的耐酸性的原因。将对硝基苯苯基-β-D-吡喃半乳糖苷放入模拟的EIICLac的活性位点表明，亚硝基与Ser248的-NH-结合，这可以解释为什么无法获得Pro247以外的序列数据。