肿瘤微环境提供了一个专门的利基市场，其中大量的干细胞样细胞得以丰富并有助于癌症的发展。此外，癌症干细胞（CSC）表型已与上皮-间质转化（EMT）相关。在这里，我们使用来自人舌鳞状细胞癌的CAL33细胞系的三维（3D）球体培养系统，研究了肿瘤微环境对头颈部癌细胞表型特征和CSC标记表达的影响。源自2D单层培养的CAL33细胞在含有无血清培养基（表皮生长因子[EGF]，成纤维细胞生长因子[FGF]和胰岛素）的球状培养物中生长。来自球体或标准对照培养物的粘附CAL33细胞在存在/不存在血清以及缺氧/缺氧的情况下生长。通过Western印迹，免疫荧光或逆转录定量PCR分析EMT，CSC和缺氧的标志物。球形培养物显示低氧微环境（高碳酸酐酶IX [CAIX]表达），间充质样特征（E-钙黏着蛋白减少，波形蛋白和N-钙黏着蛋白表达增加，由较大的散布的，密度较低的细胞组成的较大菌落的存在）和CSC标记胶质瘤相关癌基因同源物1（Gli1）的表达增加。这些效应在缺氧状态下长时间无氧（1％O2）的无血清粘附CAL33细胞中得以概括，相反，血清的存在则完全消除了这种作用。总的来说，我们发现缺氧，EGF和FGF的结合对于在粘附的CAL33细胞培养物中诱导EMT是必不可少的。



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