AvrRxv is a member of a family of pathogen effectors present in pathogens of both plant and mammalian species. Xanthomonas campestris pv. vesicatoria strains carrying AvrRxv induce a hypersensitive response (HR) in the tomato cultivar Hawaii 7998. Using a yeast two-hybrid screen, we identified a 14-3-3 protein from tomato that interacts with AvrRxv called AvrRxv Interactor 1 (ARI1). The interaction was confirmed in vitro with affinity chromatography. Using mutagenesis, we identified a 14-3-3-binding domain in AvrRxv and demonstrated that a mutant in that domain showed concomitant loss of interaction with ARI1 and HR-inducing activity in tomato. These results demonstrate that the AvrRxv bacterial effector recruits 14-3-3 proteins for its function within host cells. AvrRxv homologues YopP and YopJ from Yersinia do not have AvrRxv-specific HR-inducing activity when delivered into tomato host cells by Agrobacterium. Although YopP itself cannot induce HR, its C-terminal domain containing the catalytic residues can replace that of AvrRxv in an AvrRxv-YopP chimera for HR-inducing activity. Phylogenetic analysis indicates that the sequences encoding the C-termini of family members are evolving independently from those encoding the N-termini. Our results support a model in which there are three functional domains in proteins of the family, translocation, interaction, and catalytic.

中文翻译：

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鉴定与黄单胞菌效应子 AvrRxv 相互作用的宿主 14-3-3 蛋白

AvrRxv 是存在于植物和哺乳动物物种病原体中的病原体效应子家族的成员。Xanthomonas campestris pv. 携带 AvrRxv 的 vesicatoria 菌株在番茄栽培品种夏威夷 7998 中诱导过敏反应 (HR)。使用酵母双杂交筛选，我们从番茄中鉴定了一种 14-3-3 蛋白，该蛋白与 AvrRxv 相互作用，称为 AvrRxv Interactor 1 (ARI1)。用亲和层析在体外证实了相互作用。使用诱变，我们在 AvrRxv 中确定了一个 14-3-3 结合域，并证明该域中的突变体表现出与番茄中 ARI1 和 HR 诱导活性的相互作用的伴随丧失。这些结果表明 AvrRxv 细菌效应器募集 14-3-3 蛋白以发挥其在宿主细胞内的功能。来自耶尔森氏菌的 AvrRxv 同源物 YopP 和 YopJ 在被农杆菌传递到番茄宿主细胞中时不具有 AvrRxv 特异性 HR 诱导活性。尽管 YopP 本身不能诱导 HR，但其包含催化残基的 C 端结构域可以替代 AvrRxv-YopP 嵌合体中 AvrRxv 的结构域，以实现 HR 诱导活性。系统发育分析表明，编码家族成员 C 端的序列独立于编码 N 端的序列进化。我们的结果支持一个模型，其中该家族的蛋白质具有三个功能域：易位、相互作用和催化。系统发育分析表明，编码家族成员 C 端的序列独立于编码 N 端的序列进化。我们的结果支持一个模型，其中该家族的蛋白质具有三个功能域：易位、相互作用和催化。系统发育分析表明，编码家族成员 C 端的序列独立于编码 N 端的序列进化。我们的结果支持一个模型，其中该家族的蛋白质具有三个功能域：易位、相互作用和催化。