A critical point in the V(1) sector and entire V(1)V(O) complex is the interaction of stalk subunits G (Vma10p) and E (Vma4p). Previous work, using precipitation assays, has shown that both subunits form a complex. In this work, we have analysed the N-terminal segment of subunit G (G(1-59)) of the V(1)V(O) ATPase from Saccharomyces cerevisiae by using nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy. Analyses of (1)H-(15)N heteronuclear single quantum coherence (HSQC) spectra of G(1-59) in the absence and presence of the N-terminal peptides E(1-18) and E(18-38) as well as the produced and purified C-terminal segment (E(39-233)) shows specific interactions only with the peptide fragment E(18-38). The binding of this peptide occurs via the residues M(1), V(2), S(3), and K(5) as well for V(22), S(23), K(24), A(25) and R(26) of G(1-59). The specific E(18-38)/G(1-59) binding has been confirmed by fluorescence correlation spectroscopy data. The E(18-38) peptide has been studied by CD spectroscopy and NMR. The 3D structure of this peptide adopts a stable helix-hinge-helix formation in solution. A model structure of the E(18-38)/G(1-59) complex reveals the orientation of E(18-38) relative to G(1-59) via salt-bridges of the polar residues and van der Waals forces at the very N-terminus of both segments.

中文翻译：

---

光谱鉴定酵母V-ATPase G亚基与E亚基的关系。

V（1）扇区和整个V（1）V（O）络合物中的关键点是茎亚基G（Vma10p）和E（Vma4p）的相互作用。使用沉淀测定的先前工作表明，两个亚基形成复合物。在这项工作中，我们已经通过使用核磁共振（NMR）光谱分析了来自酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的V（1）V（O）ATPase G亚基G（G（1-59））的N末端片段。在不存在和存在N末端肽E（1-18）和E（18-38）的情况下G（1-59）的（1）H-（15）N异核单量子相干（HSQC）光谱分析以及产生和纯化的C末端片段（E（39-233））仅显示与肽片段E（18-38）的特异性相互作用。该肽的结合通过残基M（1），V（2），S（3）和K（5）以及V（22），S（23），K（24），A（25）进行）和G（1-59）的R（26）。特定的E（18-38）/ G（1-59）绑定已通过荧光相关光谱数据确认。E（18-38）肽已通过CD光谱和NMR研究。该肽的3D结构在溶液中采用稳定的螺旋-铰链-螺旋形式。E（18-38）/ G（1-59）配合物的模型结构通过极性残基的盐桥和范德华力揭示了E（18-38）相对于G（1-59）的取向在两个网段的N端。