Gonadotropin-releasing hormone (GnRH) is secreted from hypothalamic neurons (GnRH neurons) and stimulates anterior pituitary gonadotrophs to synthesize and secrete gonadotropins. In addition to gonadotrophs, GnRH neurons also express GnRH receptors, and the autocrine action of GnRH is reportedly involved in the regulation of functions of GnRH neurons. There is accumulating evidence that extracellular signal-regulated kinase (ERK), one of mitogen-activated protein kinases (MAPKs), is activated by GnRH and involved in various effects of GnRH in GnRH neurons. In the present study, we performed microarray analysis to examine the types of genes whose expression was regulated by GnRH in immortalized mouse GnRH neurons (GT1-7 cells). We found that 257 genes among 55,681 genes examined were up-regulated after 30-min treatment of GT1-7 cells with GnRH. These up-regulated genes included four dual-specificity MAPK phosphatases (DUSPs), DUSP1, DUSP2, DUSP5, and DUSP6. Reverse transcription-polymerase chain reaction analysis confirmed that the mRNA levels of DUSP5 and DUSP6 were robustly increased within 30 min. U0126, an inhibitor of ERK activation, completely inhibited the increases in the mRNA levels of DUSP5 and DUSP6. Immunoblotting analysis revealed that ERK activation peaked at 5 min and declined steeply at 60 min, whereas DUSP5 and DUSP6 proteins were increased from 60 min. It was notable that down-regulation of DUSP6 augmented GnRH-induced ERK activation approximately 1.7-fold at 60 min. These results suggested that the up-regulation of DUSP6 regulates the duration of ERK activation at least in part.

中文翻译：

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促性腺激素释放激素在培养的下丘脑神经元GT1-7细胞中对DUSP5和DUSP6的上调。

促性腺激素释放激素（GnRH）从下丘脑神经元（GnRH神经元）分泌，并刺激垂体前叶促性腺激素合成和分泌促性腺激素。除了促性腺激素外，GnRH神经元还表达GnRH受体，据报道GnRH的自分泌作用与GnRH神经元的功能调节有关。有越来越多的证据表明，细胞外信号调节激酶（ERK）是一种促分裂原激活的蛋白激酶（MAPK），被GnRH激活，并参与GnRH在GnRH神经元中的多种作用。在本研究中，我们进行了微阵列分析，以检查永生化小鼠GnRH神经元（GT1-7细胞）中受GnRH调节表达的基因类型。我们发现，用GnRH处理GT1-7细胞30分钟后，检测到的55,681个基因中的257个基因被上调。这些上调的基因包括四个双特异性MAPK磷酸酶（DUSPs），DUSP1，DUSP2，DUSP5和DUSP6。逆转录-聚合酶链反应分析证实，在30分钟内DUSP5和DUSP6的mRNA水平显着增加。U0126，一种ERK激活抑制剂，完全抑制DUSP5和DUSP6 mRNA的增加。免疫印迹分析表明，ERK激活在5分钟达到峰值，而在60分钟急剧下降，而DUSP5和DUSP6蛋白从60分钟开始增加。值得注意的是，DUSP6的下调在60分钟时增加了GnRH诱导的ERK活化约1.7倍。这些结果表明，DUSP6的上调至少部分调节ERK激活的持续时间。DUSP5和DUSP6。逆转录-聚合酶链反应分析证实，在30分钟内DUSP5和DUSP6的mRNA水平显着增加。U0126，一种ERK激活抑制剂，完全抑制DUSP5和DUSP6 mRNA的增加。免疫印迹分析表明，ERK激活在5分钟达到峰值，而在60分钟急剧下降，而DUSP5和DUSP6蛋白从60分钟开始增加。值得注意的是，DUSP6的下调在60分钟时增加了GnRH诱导的ERK活化约1.7倍。这些结果表明，DUSP6的上调至少部分调节ERK激活的持续时间。DUSP5和DUSP6。逆转录-聚合酶链反应分析证实，在30分钟内DUSP5和DUSP6的mRNA水平显着增加。U0126，一种ERK激活抑制剂，完全抑制DUSP5和DUSP6 mRNA的增加。免疫印迹分析表明，ERK激活在5分钟达到峰值，而在60分钟急剧下降，而DUSP5和DUSP6蛋白从60分钟开始增加。值得注意的是，DUSP6的下调在60分钟时增加了GnRH诱导的ERK活化约1.7倍。这些结果表明，DUSP6的上调至少部分调节了ERK激活的持续时间。ERK激活的抑制剂完全抑制DUSP5和DUSP6 mRNA的增加。免疫印迹分析表明，ERK激活在5分钟达到峰值，而在60分钟急剧下降，而DUSP5和DUSP6蛋白从60分钟开始增加。值得注意的是，DUSP6的下调在60分钟时增加了GnRH诱导的ERK活化约1.7倍。这些结果表明，DUSP6的上调至少部分调节了ERK激活的持续时间。ERK激活的抑制剂完全抑制DUSP5和DUSP6 mRNA的增加。免疫印迹分析表明，ERK激活在5分钟达到峰值，而在60分钟急剧下降，而DUSP5和DUSP6蛋白从60分钟开始增加。值得注意的是，DUSP6的下调在60分钟时增加了GnRH诱导的ERK活化约1.7倍。这些结果表明，DUSP6的上调至少部分调节ERK激活的持续时间。60分钟时7倍。这些结果表明，DUSP6的上调至少部分调节ERK激活的持续时间。60分钟时为7倍。这些结果表明，DUSP6的上调至少部分调节ERK激活的持续时间。